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695

木虫 (职业作家)

[交流] 测序关于碱基的确定 已有1人参与

现在我的RACE基本就快确定了,序列也拼接的差不多了,但是现在遇到两个碱基差异的问题,还望有经验的虫友多多指教!

具体问题是,在我的overlapping fragment上,有两个碱基与我的5RACE产物测序不一致,具体表现在1.多出了一个碱基C;2.原有CDS序列上是T,而我的测序显示为C。但是我的3RACE测序与已发表的CDS序列是一致的,这里附上测序结果,望大家相助,看我该如何定夺,还是继续在多加测序,不甚感激!
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木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-26 00:05:
从峰图上可以看出碱基的峰很明显,应该不是测错了或者拼接错了。建议用像如Kod这样的高保真酶重新PCR,测序。

也不是了,我就是这两个碱基的差异,我想我是否可以设计两端引物,再做扩增全长测序验证,我当时用的是Advantage 2 PCR polymerase!
5楼2009-09-26 05:12:27
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