24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 780  |  回复: 12
当前主题已经存档。

小心点

金虫 (正式写手)

[交流] 乳酸菌质粒电泳问题

我在做野生植物乳杆菌质粒提取的时候,总是会出现附件图片这种情况。我怀疑是蛋白杂质问题,但是我已做过两次酚氯仿抽提,如果酚氯仿抽提次数增多的话,质粒浓度也会大大下降,不利于后续操作。请问高手怎么样能把杂质处理干净,提取更纯净的质粒?谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

抽提还是有必要的,可以尝试除下RNA,电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图,所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大,这样就可以尽量减少损失,如果浓度实在太低就沉淀后再用少量缓冲液溶解好了。

[ Last edited by wjswj on 2009-9-24 at 16:50 ]
金币是赌出来的
2楼2009-09-24 16:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

好似有带,但是质量也太差 了,RNA还没除,试剂没问题吧
3楼2009-09-24 16:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2009-9-24 16:47:
抽提还是有必要的,可以尝试除下RNA,电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图,所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大,这样就可以尽量减少损失,如果浓度实在太低就沉淀后再用少 ...

谢谢,图片已编辑过。
浓度不是问题啊,我用50ml的菌液提取的,最后浓缩到100微升,但是是杂质处理不干净,这张还是能看出质粒的。目前提质粒的白条的背景已经完全把质粒条带给覆盖了,啥都看不到了。rna酶也加过了,处理时间不够长,因此rna比较明显。
4楼2009-09-24 16:54:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 695 at 2009-9-24 16:48:
好似有带,但是质量也太差 了,RNA还没除,试剂没问题吧

试剂绝对没问题,都是标准试剂,就是杂质处理不干净,rna其实问题不大,我的质粒蛮大的,rna没什么干扰
5楼2009-09-24 16:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

firefly75

木虫 (著名写手)

★ ★
小心点(金币+2,VIP+0): 9-29 20:42
可以尝试下用蛋白酶K处理,或者直接用试剂盒纯化你所抽提的质粒。
6楼2009-09-24 17:01:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by firefly75 at 2009-9-24 17:01:
可以尝试下用蛋白酶K处理,或者直接用试剂盒纯化你所抽提的质粒。

用蛋白酶K?在哪一步?蛋白酶K不也是杂蛋白,怎么把蛋白酶K除去?
7楼2009-09-24 18:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

为什么会弥散呢? 用溶菌酶处理了多长时间?
8楼2009-09-24 22:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

用试剂盒吧~~~~
修炼ing,当虫仙……
9楼2009-09-25 14:33:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2009-9-24 22:56:
为什么会弥散呢? 用溶菌酶处理了多长时间?

不是质粒弥散,是杂质,最终沉淀明显有很多白色的物质~
10楼2009-09-26 20:39:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小心点 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +7 山阿蔓 2026-04-07 7/350 2026-04-13 16:44 by 张zhihao
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +26 土豆er? 2026-04-09 29/1450 2026-04-13 15:15 by 独醉梦孤城
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 346分,工科0854求调剂,专硕 +6 moser233 2026-04-12 7/350 2026-04-12 22:11 by fqwang
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +7 Ytyt11 2026-04-09 8/400 2026-04-12 16:57 by ajpv风雷
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 071000生物学调剂求助 +17 zzzzwww 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 15:55 by 求调剂zz
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学, +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂,接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
[考研] 求调剂,现在还能填的 +3 上岸小莹加油 2026-04-08 3/150 2026-04-08 14:30 by zhq0425
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-07 11/550 2026-04-07 15:13 by shdgaomin
信息提示
请填处理意见