24小时热门版块排行榜    

查看: 882  |  回复: 12
当前主题已经存档。

小心点

金虫 (正式写手)

[交流] 乳酸菌质粒电泳问题

我在做野生植物乳杆菌质粒提取的时候,总是会出现附件图片这种情况。我怀疑是蛋白杂质问题,但是我已做过两次酚氯仿抽提,如果酚氯仿抽提次数增多的话,质粒浓度也会大大下降,不利于后续操作。请问高手怎么样能把杂质处理干净,提取更纯净的质粒?谢谢。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

抽提还是有必要的,可以尝试除下RNA,电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图,所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大,这样就可以尽量减少损失,如果浓度实在太低就沉淀后再用少量缓冲液溶解好了。

[ Last edited by wjswj on 2009-9-24 at 16:50 ]
金币是赌出来的
2楼2009-09-24 16:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

好似有带,但是质量也太差 了,RNA还没除,试剂没问题吧
3楼2009-09-24 16:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2009-9-24 16:47:
抽提还是有必要的,可以尝试除下RNA,电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图,所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大,这样就可以尽量减少损失,如果浓度实在太低就沉淀后再用少 ...

谢谢,图片已编辑过。
浓度不是问题啊,我用50ml的菌液提取的,最后浓缩到100微升,但是是杂质处理不干净,这张还是能看出质粒的。目前提质粒的白条的背景已经完全把质粒条带给覆盖了,啥都看不到了。rna酶也加过了,处理时间不够长,因此rna比较明显。
4楼2009-09-24 16:54:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 695 at 2009-9-24 16:48:
好似有带,但是质量也太差 了,RNA还没除,试剂没问题吧

试剂绝对没问题,都是标准试剂,就是杂质处理不干净,rna其实问题不大,我的质粒蛮大的,rna没什么干扰
5楼2009-09-24 16:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

firefly75

木虫 (著名写手)

★ ★
小心点(金币+2,VIP+0): 9-29 20:42
可以尝试下用蛋白酶K处理,或者直接用试剂盒纯化你所抽提的质粒。
6楼2009-09-24 17:01:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by firefly75 at 2009-9-24 17:01:
可以尝试下用蛋白酶K处理,或者直接用试剂盒纯化你所抽提的质粒。

用蛋白酶K?在哪一步?蛋白酶K不也是杂蛋白,怎么把蛋白酶K除去?
7楼2009-09-24 18:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

为什么会弥散呢? 用溶菌酶处理了多长时间?
8楼2009-09-24 22:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

用试剂盒吧~~~~
修炼ing,当虫仙……
9楼2009-09-25 14:33:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2009-9-24 22:56:
为什么会弥散呢? 用溶菌酶处理了多长时间?

不是质粒弥散,是杂质,最终沉淀明显有很多白色的物质~
10楼2009-09-26 20:39:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小心点 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +59 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 62/3100 2026-08-14 05:15 by 7bSeoHKaatQG
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +11 医学老男孩 2026-08-13 29/1450 2026-08-14 00:04 by 大快人心啦
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
信息提示
请填处理意见