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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 乳酸菌质粒电泳问题
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小心点

金虫 (正式写手)

[交流] 乳酸菌质粒电泳问题

我在做野生植物乳杆菌质粒提取的时候，总是会出现附件图片这种情况。我怀疑是蛋白杂质问题，但是我已做过两次酚氯仿抽提，如果酚氯仿抽提次数增多的话，质粒浓度也会大大下降，不利于后续操作。请问高手怎么样能把杂质处理干净，提取更纯净的质粒？谢谢。
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1楼 2009-09-24 16:39:42
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
抽提还是有必要的，可以尝试除下RNA，电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图，所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大，这样就可以尽量减少损失，如果浓度实在太低就沉淀后再用少量缓冲液溶解好了。

[ Last edited by wjswj on 2009-9-24 at 16:50 ]
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金币是赌出来的
2楼2009-09-24 16:47:13
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695

木虫 (职业作家)
好似有带，但是质量也太差 了，RNA还没除，试剂没问题吧
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3楼2009-09-24 16:48:47
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小心点

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2009-9-24 16:47:
抽提还是有必要的，可以尝试除下RNA，电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图，所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大，这样就可以尽量减少损失，如果浓度实在太低就沉淀后再用少 ...

谢谢，图片已编辑过。
浓度不是问题啊，我用50ml的菌液提取的，最后浓缩到100微升，但是是杂质处理不干净，这张还是能看出质粒的。目前提质粒的白条的背景已经完全把质粒条带给覆盖了，啥都看不到了。rna酶也加过了，处理时间不够长，因此rna比较明显。
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4楼2009-09-24 16:54:07
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小心点

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 695 at 2009-9-24 16:48:
好似有带，但是质量也太差 了，RNA还没除，试剂没问题吧

试剂绝对没问题，都是标准试剂，就是杂质处理不干净，rna其实问题不大，我的质粒蛮大的，rna没什么干扰
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5楼2009-09-24 16:56:09
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firefly75

木虫 (著名写手)
★ ★
小心点(金币+2,VIP+0): 9-29 20:42
可以尝试下用蛋白酶K处理，或者直接用试剂盒纯化你所抽提的质粒。
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6楼2009-09-24 17:01:32
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小心点

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by firefly75 at 2009-9-24 17:01:
可以尝试下用蛋白酶K处理，或者直接用试剂盒纯化你所抽提的质粒。

用蛋白酶K？在哪一步？蛋白酶K不也是杂蛋白，怎么把蛋白酶K除去？
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7楼2009-09-24 18:50:32
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
为什么会弥散呢？ 用溶菌酶处理了多长时间？
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8楼2009-09-24 22:56:53
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j2

木虫 (正式写手)
用试剂盒吧~~~~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
9楼2009-09-25 14:33:18
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小心点

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2009-9-24 22:56:
为什么会弥散呢？ 用溶菌酶处理了多长时间？

不是质粒弥散，是杂质，最终沉淀明显有很多白色的物质~
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10楼2009-09-26 20:39:34
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