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汕头大学海洋科学接受调剂
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小心点

金虫 (正式写手)

[交流] 乳酸菌质粒电泳问题

我在做野生植物乳杆菌质粒提取的时候,总是会出现附件图片这种情况。我怀疑是蛋白杂质问题,但是我已做过两次酚氯仿抽提,如果酚氯仿抽提次数增多的话,质粒浓度也会大大下降,不利于后续操作。请问高手怎么样能把杂质处理干净,提取更纯净的质粒?谢谢。
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小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wjswj at 2009-9-24 16:47:
抽提还是有必要的,可以尝试除下RNA,电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图,所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大,这样就可以尽量减少损失,如果浓度实在太低就沉淀后再用少 ...

谢谢,图片已编辑过。
浓度不是问题啊,我用50ml的菌液提取的,最后浓缩到100微升,但是是杂质处理不干净,这张还是能看出质粒的。目前提质粒的白条的背景已经完全把质粒条带给覆盖了,啥都看不到了。rna酶也加过了,处理时间不够长,因此rna比较明显。
4楼2009-09-24 16:54:07
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

抽提还是有必要的,可以尝试除下RNA,电泳应该可以跑的更好看。通常大家习惯看从上往下跑的图,所以还请把图旋转180度比较方便。
抽提时可以把体积放大,这样就可以尽量减少损失,如果浓度实在太低就沉淀后再用少量缓冲液溶解好了。

[ Last edited by wjswj on 2009-9-24 at 16:50 ]
金币是赌出来的
2楼2009-09-24 16:47:13
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695

木虫 (职业作家)

好似有带,但是质量也太差 了,RNA还没除,试剂没问题吧
3楼2009-09-24 16:48:47
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小心点

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 695 at 2009-9-24 16:48:
好似有带,但是质量也太差 了,RNA还没除,试剂没问题吧

试剂绝对没问题,都是标准试剂,就是杂质处理不干净,rna其实问题不大,我的质粒蛮大的,rna没什么干扰
5楼2009-09-24 16:56:09
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