应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提真菌RNA老是降解怎么回事？
91/1返回列表
查看: 1153  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

solemon23

木虫 (著名写手)

五星上将James下士

[交流] 提真菌RNA老是降解怎么回事？

准备做DDRT-PCR，用Trizol法提取RNA，完整性总是不好，找不出原因，请教各位大侠，指点一二。
提取真菌RNA，OD值如下：
260/280
1.97
1.98
1.87

260/230
1.53
1.18
1.03
电泳图片如下：
回复此楼

» 猜你喜欢
人似秋鸿来有信，事如春梦了无痕。
1楼 2009-09-21 16:09:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imwjc

金虫 (小有名气)
★
solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:22
是完全按照Trizol说明书做的吗？有没有在匀浆或研磨破壁后离心呀？
赞一下(6人) 回复此楼
2楼2009-09-22 12:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuizy2007

至尊木虫 (著名写手)
★
solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:22
人身体、唾液中有很多RNA酶，是不是提取的环境不够清洁，或者说话了什么的……
赞一下(6人) 回复此楼
3楼2009-09-22 12:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★
solemon23(金币+2,VIP+0):xiexie 1-3 23:22
偶有段时间也这样，当然我不是提真菌的，后来提好了也没找出是什么原因。。。
记得当时的转折点是加异丙醇以后，轻柔的转动，不过后来偶剧烈震荡也没有什么问题了。。。。
建议器具处理、灭菌要彻底，操作环境提前碰酒精，有条件可以用紫外照照，准备工作做好，放心大胆提就是了，你越勇敢RNase越脆弱。。。
赞一下(6人) 回复此楼
4楼2009-09-22 13:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
solemon23(金币+2,VIP+0):xiexie 1-3 23:23
降解得很厉害，首先要确定提取RNA的仪器和试剂没有RNAase污染，研钵研棒180度烘3-4h，其他要用的东西高压灭菌3次，试剂也要用RNAasefree water 配制；其次，在研磨的时候速度要快，防止冻融后细胞的内源RNAase降解，最好在无菌工作台内进行操作
赞一下(5人) 回复此楼
5楼2009-09-22 18:00:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqx

木虫 (著名写手)
★
solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:23
真菌 含多糖很多。
回复此楼
6楼2009-09-22 18:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
★
solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:23
降解的原因吧！条带不亮！我们实验室的师姐说TRIZOL法的提取效率不高，对于真菌来说！不如异硫酸氰胍法！
赞一下(5人) 回复此楼
7楼2009-09-22 19:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nhdxhjs

铁杆木虫 (正式写手)
★
solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:23
提取过程中有污染
赞一下(4人) 回复此楼
8楼2009-09-23 22:11:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caicaiyy

铜虫 (小有名气)
★
solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:23
不是方法的问题，我做多，这方法还行，那可能是被降解了，器具要经DEPC浸泡，戴手套做，做完之后立即PCR,别放太久，RNA一两天就会被降解掉的。
赞一下(4人) 回复此楼
9楼2009-10-07 18:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 solemon23 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭