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solemon23

木虫 (著名写手)

五星上将James下士

[交流] 提真菌RNA老是降解怎么回事?

准备做DDRT-PCR,用Trizol法提取RNA,完整性总是不好,找不出原因,请教各位大侠,指点一二。
提取真菌RNA,OD值如下:
260/280
1.97
1.98
1.87

260/230
1.53
1.18
1.03
电泳图片如下:
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人似秋鸿来有信,事如春梦了无痕。
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nhdxhjs

铁杆木虫 (正式写手)


solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:23
提取过程中有污染
8楼2009-09-23 22:11:04
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imwjc

金虫 (小有名气)


solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:22
是完全按照Trizol说明书做的吗?有没有在匀浆或研磨破壁后离心呀?
2楼2009-09-22 12:05:40
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cuizy2007

至尊木虫 (著名写手)


solemon23(金币+1,VIP+0):xiexie 1-3 23:22
人身体、唾液中有很多RNA酶,是不是提取的环境不够清洁,或者说话了什么的……
3楼2009-09-22 12:55:13
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bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★
solemon23(金币+2,VIP+0):xiexie 1-3 23:22
偶有段时间也这样,当然我不是提真菌的,后来提好了也没找出是什么原因。。。
记得当时的转折点是加异丙醇以后,轻柔的转动,不过后来偶剧烈震荡也没有什么问题了。。。。
建议器具处理、灭菌要彻底,操作环境提前碰酒精,有条件可以用紫外照照,准备工作做好,放心大胆提就是了,你越勇敢RNase越脆弱。。。
4楼2009-09-22 13:56:40
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