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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 【求助】很棘手的蛋白含量测定
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lwj19870125

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】很棘手的蛋白含量测定

做纤维素酶的固定化时用到一种pH敏感的载体，该载体含有羧基，叔氨基，酯基，固定化结束时调pH让载体沉淀，要测上清液中蛋白含量，但还有少量残留的载体，试了很多方法（考马斯亮蓝，lowry法，紫外），测出的结果比我加进去的总蛋白含量还高很多，原因可能是聚合物载体与蛋白含有类似的基团，产生了干扰，各位虫友帮我想想办法啊，做了很长时间了，蛋白测定还是没搞定
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1楼 2009-09-18 16:08:10
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lwb1987521

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
抢个沙发，楼主- - 我们2个的名字怎么这么像啊。。。。
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2楼2009-09-18 16:44:34
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your2007

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用二喹啉甲酸检测法(BCA法)测蛋白含量，可以考虑下
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爱人者被爱，敬人者人敬
3楼2009-09-18 17:03:49
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
帮你顶....用folin-酚法测
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4楼2009-09-18 17:06:34
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syuchenj

金虫 (正式写手)
★ ★
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wujin41658(金币+1,VIP+0):欢迎参加技术讨论~~~~ 9-19 22:27
双缩脲法，其干扰物特征与lowry法（folin-酚法）略有不同，可能会有差异。用你的载体试试看，干扰有多大。
还有干扰，那就痛苦了，
（1）可以采用总氨基酸定量的方法，测定原料中的总氨基酸，再测定上清中的总氨基酸。尽管这个方法实际上也不是很准，但是大概能够定量
（2）可以采用三氯醋酸沉淀法，获得沉淀后，采用凯氏定氮法，这个方法如果你的载体不是在体系中也可以沉淀的话，那么会有效的。这个是消除无机氮的常规方法。
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5楼2009-09-18 19:25:03
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zshlq
6楼2009-09-19 13:59:07
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lwj19870125

木虫 (小有名气)
BCA不行吧，BCA里含有两个羧基钠盐，而我的载体和蛋白含有的基团很类似，都含有羧基还有碱性的氨基，载体-叔氨基，酶蛋白-伯、仲氨基
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7楼2009-09-19 17:17:27
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lwj19870125

木虫 (小有名气)
我的上清液里主要含有酶蛋白，但有残留的载体还有载体-酶，就是这些残留的载体影响了蛋白含量的测定，我用考马斯亮蓝和folin-酚试剂和一定浓度的纯载体溶液混合发生显色反应，做全波长扫描，他们的最大吸收峰也很接近，郁闷
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8楼2009-09-19 17:20:38
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lwj19870125

木虫 (小有名气)
syuchenj的第一个提议可以试试，呵呵，我在看看这方面的文献，谢谢啦
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9楼2009-09-19 17:21:55
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shijs

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议通过电泳法进行酶蛋白测定，可以根据条带比较蛋白的含量。一次可以做多个条带，比测蛋白迅速，抗干扰。

如果用测蛋白法，建议先对载体的干扰情况进行分析，同时通过另外一种方法测定载体的含量，从总蛋白中进行扣除。
W总蛋白-W载体=W酶蛋白，其中W载体应该使用其他专属方法进行测定，
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10楼2009-09-20 23:57:22
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