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lwj19870125

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】很棘手的蛋白含量测定

做纤维素酶的固定化时用到一种pH敏感的载体,该载体含有羧基,叔氨基,酯基,固定化结束时调pH让载体沉淀,要测上清液中蛋白含量,但还有少量残留的载体,试了很多方法(考马斯亮蓝,lowry法,紫外),测出的结果比我加进去的总蛋白含量还高很多,原因可能是聚合物载体与蛋白含有类似的基团,产生了干扰,各位虫友帮我想想办法啊,做了很长时间了,蛋白测定还是没搞定
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lwb1987521

木虫 (正式写手)


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抢个沙发,楼主- - 我们2个的名字怎么这么像啊。。。。
2楼2009-09-18 16:44:34
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your2007

至尊木虫 (著名写手)


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用二喹啉甲酸检测法(BCA法)测蛋白含量,可以考虑下
爱人者被爱,敬人者人敬
3楼2009-09-18 17:03:49
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chenyyy

新虫 (正式写手)


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帮你顶....用folin-酚法测
4楼2009-09-18 17:06:34
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syuchenj

金虫 (正式写手)

★ ★
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wujin41658(金币+1,VIP+0):欢迎参加技术讨论~~~~ 9-19 22:27
双缩脲法,其干扰物特征与lowry法(folin-酚法)略有不同,可能会有差异。用你的载体试试看,干扰有多大。
还有干扰,那就痛苦了,
(1)可以采用总氨基酸定量的方法,测定原料中的总氨基酸,再测定上清中的总氨基酸。尽管这个方法实际上也不是很准,但是大概能够定量
(2)可以采用三氯醋酸沉淀法,获得沉淀后,采用凯氏定氮法,这个方法如果你的载体不是在体系中也可以沉淀的话,那么会有效的。这个是消除无机氮的常规方法。
5楼2009-09-18 19:25:03
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6楼2009-09-19 13:59:07
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lwj19870125

木虫 (小有名气)

BCA不行吧,BCA里含有两个羧基钠盐,而我的载体和蛋白含有的基团很类似,都含有羧基还有碱性的氨基,载体-叔氨基,酶蛋白-伯、仲氨基
7楼2009-09-19 17:17:27
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lwj19870125

木虫 (小有名气)

我的上清液里主要含有酶蛋白,但有残留的载体还有载体-酶,就是这些残留的载体影响了蛋白含量的测定,我用考马斯亮蓝和folin-酚试剂和一定浓度的纯载体溶液混合发生显色反应,做全波长扫描,他们的最大吸收峰也很接近,郁闷
8楼2009-09-19 17:20:38
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lwj19870125

木虫 (小有名气)

syuchenj的第一个提议可以试试,呵呵,我在看看这方面的文献,谢谢啦
9楼2009-09-19 17:21:55
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shijs

铁虫 (初入文坛)


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建议通过电泳法进行酶蛋白测定,可以根据条带比较蛋白的含量。一次可以做多个条带,比测蛋白迅速,抗干扰。

如果用测蛋白法,建议先对载体的干扰情况进行分析,同时通过另外一种方法测定载体的含量,从总蛋白中进行扣除。
W总蛋白-W载体=W酶蛋白,其中W载体应该使用其他专属方法进行测定,
10楼2009-09-20 23:57:22
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