24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

695

木虫 (职业作家)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 4528.5
散金: 126
红花: 5
帖子: 3149
在线: 394.1小时
虫号: 347369
注册: 2007-04-16
专业: 植物生理与生化

[交流] 弱弱的分子生物学问题~~~~

最近遇到了两个小问题，挺起勇气在这里弱弱的和大家交流两个问题：

1。假如单引物能在PCR中扩出带来，而这个引物与已知模板序列BLAST没有结合位点，且不加模板的空白对照也无条带产生，你最先想到的可能原因是什么？该引物污染？退火温度过低？还有其他原因吗？

2. 假使某单引物能P出一条带，而且带型清晰，我能用该引物直接进行测序吗？若不能原因可能又是什么呢？

多谢了，本人基础不是很好，还望高手们轻拍！多谢大家了！

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼 2009-09-15 03:19:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

HDLWH

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2285
红花: 6
帖子: 617
在线: 8.3小时
虫号: 578701
注册: 2008-07-04
性别: GG
专业: 生物化学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 9-15 10:19

1.引物特异性差，导致非特异性扩增
2.单引物是线性扩增，产物量要小得多（双引物是指数扩增）一般测序都需要提供双引物

赞一下(11人)

回复此楼

2楼2009-09-15 09:59:42

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

应助: 20 (小学生)
金币: 781.2
散金: 100
红花: 3
帖子: 726
在线: 71小时
虫号: 384091
注册: 2007-05-27
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 9-15 11:15

纠正楼上一下，所有测序都是单引物测序，即使双向测也是正向测一次，反向再测一次，
单引物能扩出条带说明在模板的上下游都存在错配位点，假如Blast查不出问题的话，
按道理说不加模板的对照扩不出条带，说明扩增体系没问题，但也还有另一种可能，举例如下：

原来使用引物做RTPCR时扩出来非特异性条带，比目的条带都亮，且大，送去测序才知道是DNA污染导致的，做反转录的之前没有用DNA酶处理提取的RNA，后来处理了一下，非特异性条带不见了

[ Last edited by gastrodia on 2009-9-15 at 10:49 ]

赞一下(11人)

回复此楼

3楼2009-09-15 10:41:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖