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695木虫 (职业作家)
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[交流]
弱弱的分子生物学问题~~~~
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最近遇到了两个小问题，挺起勇气在这里弱弱的和大家交流两个问题： 1。假如单引物能在PCR中扩出带来，而这个引物与已知模板序列BLAST没有结合位点，且不加模板的空白对照也无条带产生，你最先想到的可能原因是什么？该引物污染？退火温度过低？还有其他原因吗？ 2. 假使某单引物能P出一条带，而且带型清晰，我能用该引物直接进行测序吗？若不能原因可能又是什么呢？ 多谢了，本人基础不是很好，还望高手们轻拍！多谢大家了！ |
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司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 9-15 11:15
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纠正楼上一下，所有测序都是单引物测序，即使双向测也是正向测一次，反向再测一次， 单引物能扩出条带说明在模板的上下游都存在错配位点，假如Blast查不出问题的话， 按道理说不加模板的对照扩不出条带，说明扩增体系没问题，但也还有另一种可能，举例如下： 原来使用引物做RTPCR时扩出来非特异性条带，比目的条带都亮，且大，送去测序才知道是DNA污染导致的，做反转录的之前没有用DNA酶处理提取的RNA，后来处理了一下，非特异性条带不见了 [ Last edited by gastrodia on 2009-9-15 at 10:49 ] |
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