| 查看: 642 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
695木虫 (职业作家)
|
[交流]
弱弱的分子生物学问题~~~~
|
||
|
最近遇到了两个小问题，挺起勇气在这里弱弱的和大家交流两个问题： 1。假如单引物能在PCR中扩出带来，而这个引物与已知模板序列BLAST没有结合位点，且不加模板的空白对照也无条带产生，你最先想到的可能原因是什么？该引物污染？退火温度过低？还有其他原因吗？ 2. 假使某单引物能P出一条带，而且带型清晰，我能用该引物直接进行测序吗？若不能原因可能又是什么呢？ 多谢了，本人基础不是很好，还望高手们轻拍！多谢大家了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
恳请有学校收留
已经有6人回复
-
求调剂推荐
已经有8人回复
-
0854求调剂
已经有14人回复
-
300求调剂
已经有9人回复
-
291求调剂
已经有7人回复
-
289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校)
已经有4人回复
-
初试324 中药学 一志愿天中医 求调剂
已经有3人回复
-
药学求调剂
已经有14人回复
-
327求调剂
已经有27人回复
-
急需调剂
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
liganghua
铁杆木虫 (著名写手)
露天使
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 7036.5
- 散金: 6
- 红花: 4
- 帖子: 1045
- 在线: 157.8小时
- 虫号: 825184
- 注册: 2009-08-10
- 专业: 农业昆虫学
4楼2009-09-15 11:23:40
2楼2009-09-15 09:59:42
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 9-15 11:15
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 9-15 11:15
|
纠正楼上一下，所有测序都是单引物测序，即使双向测也是正向测一次，反向再测一次， 单引物能扩出条带说明在模板的上下游都存在错配位点，假如Blast查不出问题的话， 按道理说不加模板的对照扩不出条带，说明扩增体系没问题，但也还有另一种可能，举例如下： 原来使用引物做RTPCR时扩出来非特异性条带，比目的条带都亮，且大，送去测序才知道是DNA污染导致的，做反转录的之前没有用DNA酶处理提取的RNA，后来处理了一下，非特异性条带不见了 [ Last edited by gastrodia on 2009-9-15 at 10:49 ] |
3楼2009-09-15 10:41:11
heismeng
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 898.1
- 散金: 38
- 帖子: 265
- 在线: 24.7小时
- 虫号: 316216
- 注册: 2007-03-03
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
5楼2009-09-15 12:18:41
