24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1103  |  回复: 4
【悬赏金币】回答本帖问题,作者guxiaofei将赠送您 10 个金币

guxiaofei

新虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌表达载体构建 已有1人参与

各位,请问pNZ8148表达载体构建有没有什么tips啊,我有两个片段要连上去,用无缝克隆构建了3个月都没连上去,已经排除酶,实验条件,载体片段(测序,但测不到同源臂啊)等原因,同一批操作阳性都有,但是实验组就是不长斑,有的要放3天才长,一菌p,结果是空载。

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)


2楼2022-09-26 20:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiaofei

新虫 (小有名气)

而且每次双酶切后胶回收浓度非常低,10微克的质粒,回收1微克不到,浓度从几纳克到十几纳克不等,其余胶回收浓度都是50纳克每微以上。实在是想不明白。请大神们指点!

发自小木虫Android客户端
3楼2022-09-26 21:35:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiaofei

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by guxiaofei at 2022-09-26 21:35:39
而且每次双酶切后胶回收浓度非常低,10微克的质粒,回收1微克不到,浓度从几纳克到十几纳克不等,其余胶回收浓度都是50纳克每微以上。实在是想不明白。请大神们指点!
...

但是用PCR线性化做胶回收就不存在这个问题,浓度又是正常的

发自小木虫Android客户端
4楼2022-09-26 21:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyzhen

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

乳酸菌的质粒确实不好做,质粒可以不用做菌培,建议直接PCR直接出来线性质粒,这样胶回收的量会大,而且容易操作。
5楼2023-10-11 15:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guxiaofei 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +9 恬淡ye 2026-03-31 10/500 2026-04-03 11:10 by txp1986
[考研] 生物学求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 3/150 2026-04-03 10:28 by macy2011
[考研] 求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:25 by macy2011
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-04-02 4/200 2026-04-03 09:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿陕西师范大学生物学317分 +5 1563日。 2026-04-02 5/250 2026-04-03 06:58 by ilovexiaobin
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 07生物学求调剂 一志愿同济大学359分 +3 LAMC. 2026-03-30 3/150 2026-04-02 10:26 by 18828373951
[考研] 322求调剂 +5 熹僖XX 2026-03-31 6/300 2026-04-02 10:08 by 求调剂zz
[考研] 270调剂 +7 maxjxbsk 2026-04-02 7/350 2026-04-02 09:50 by yulian1987
[考研] 301求调剂 +13 A_JiXing 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:01 by sanrepian
[考研] 08生物与医药专硕初试346找调剂 +6 dianeeee 2026-04-01 7/350 2026-04-02 08:23 by guoweigw
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +3 残星拂曙 2026-03-31 3/150 2026-04-01 11:09 by 小熊raider
[考研] 318求调剂 +8 七忆77 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:37 by Jaylen.
[考研] 322求调剂 +8 三水sss 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:19 by 唐沐儿
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 312,生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见