应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 乳酸菌表达载体构建
51/1返回列表
查看: 1071  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者guxiaofei将赠送您 10 个金币

guxiaofei

新虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌表达载体构建 已有1人参与

各位，请问pNZ8148表达载体构建有没有什么tips啊，我有两个片段要连上去，用无缝克隆构建了3个月都没连上去，已经排除酶，实验条件，载体片段（测序，但测不到同源臂啊）等原因，同一批操作阳性都有，但是实验组就是不长斑，有的要放3天才长，一菌p，结果是空载。

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-09-26 15:39:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
这个载体就是不好构建

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2022-09-26 20:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiaofei

新虫 (小有名气)
而且每次双酶切后胶回收浓度非常低，10微克的质粒，回收1微克不到，浓度从几纳克到十几纳克不等，其余胶回收浓度都是50纳克每微以上。实在是想不明白。请大神们指点！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-09-26 21:35:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guxiaofei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by guxiaofei at 2022-09-26 21:35:39
而且每次双酶切后胶回收浓度非常低，10微克的质粒，回收1微克不到，浓度从几纳克到十几纳克不等，其余胶回收浓度都是50纳克每微以上。实在是想不明白。请大神们指点！
...

但是用PCR线性化做胶回收就不存在这个问题，浓度又是正常的

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2022-09-26 21:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zyzhen

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

乳酸菌的质粒确实不好做，质粒可以不用做菌培，建议直接PCR直接出来线性质粒，这样胶回收的量会大，而且容易操作。
赞一下 回复此楼
5楼2023-10-11 15:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guxiaofei 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-11 3/150 2026-03-11 14:41 by 学员8dgXkO
[考研] 0857 资源与环境 285分 +5 未名考生 2026-03-09 5/250 2026-03-11 10:20 by 沙漠之狐994
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 306求调剂 +3 唐薏薏 2026-03-09 3/150 2026-03-10 22:30 by peike
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 欢迎211本科同学，过A区国家线，A区非偏远一本，交叉学科课题组 +23 lisimayy 2026-03-04 37/1850 2026-03-10 18:10 by a1763909
[考研] 311求调剂 +3 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 3/150 2026-03-10 16:19 by 球场大飞机
[考研] 材料与化工，291，求调剂 +12 咕噜咕噜123123 2026-03-05 13/650 2026-03-10 13:50 by allen-yin
[考研] 求调剂 一志愿苏州大学，0856化工323分 | 本科应化 | 有专利/竞赛/科研助手经历 | +7 橙子cyx 2026-03-06 9/450 2026-03-10 12:03 by kiokin
[考研] 调剂的同学，走过路过，不要错过 +11 likeihood 2026-03-06 16/800 2026-03-10 11:38 by Djdjj12
[考研] 085701环境工程295求调剂，一志愿A区211 +8 等春来， 2026-03-06 9/450 2026-03-10 10:38 by 沙漠之狐994
[考研] 313求调剂 +4 Yyt杨1 2026-03-07 5/250 2026-03-09 13:48 by macy2011
[考研] 085701环境工程专硕求调剂 +5 幼稚园大班打手 2026-03-08 5/250 2026-03-09 07:07 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工290求调剂 +7 Nebulala 2026-03-08 8/400 2026-03-09 05:25 by houyaoxu
[考研] 求调剂 +3 拾柒12。 2026-03-08 3/150 2026-03-08 17:33 by bingxueer79
[考研] 347求调剂 +4 浮云满足 2026-03-07 4/200 2026-03-08 16:46 by 星空星月
[考研] 306求调剂 +7 Bahati 2026-03-05 7/350 2026-03-06 22:11 by 星空星月
[考研] 材料与化工354调剂 +4 Lucy-xiao 2026-03-06 7/350 2026-03-06 09:57 by hxuq8429
[考研] 材料调剂 +5 ws 上岸鸭 2026-03-05 5/250 2026-03-05 20:06 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭