应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切拖带和切不开的现象
51/1返回列表
查看: 1412  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者tchv8378将赠送您 100 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切拖带和切不开的现象 已有2人参与

求助，我在用PCR的扩增液做单酶切，之前做的好好的没什么问题，最近发现按照之前完全相同的流程酶切切不开或者切开有拖带的现象。我开封了新的引物，新的内切酶，延长了酶切时间，减小了点样时扩增液的点样量，重新提了DNA，将buffer（10x）的含量提升到了酶切体系的1/10，酶切时间从2小时、4小时到过夜都有尝试过但还是没有达到之前的水平。

请问大佬还有其他什么原因吗？万分感谢！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-09-18 13:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ap372767129

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我看了一下大家的回复，我分析应该是你的实验操作应该是没有问题的。你试试PCR完了后，切胶回收你的目的条带，溶解后再进行酶切看看。如果还是切不开，考虑一下是不是引物设计的问题，一般情况下设计的引物TM值是60，祝你成功。
赞一下 回复此楼
8楼2022-09-20 20:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
换一个工程菌 我之前是验证保了两株100测序正确的 其中一株怎么切怎么换，单酶切体系都有两个条带。直到我换了另一株立马没问题了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
2楼2022-09-18 18:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
1.工程菌污染
2.实验室气溶胶污染~换个实验室换套枪做实验
把这些问题排除下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
3楼2022-09-18 18:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-09-18 18:34:04
换一个工程菌 我之前是验证保了两株100测序正确的 其中一株怎么切怎么换，单酶切体系都有两个条带。直到我换了另一株立马没问题了

谢谢回复，我这个用不到工程菌，我这个实验是提取的血液DNA扩增做酶切分型。我在网上看到其他原因可能是buffer和扩增液没有完全混合，请问在配体系时和用枪吹打几次行不行？
赞一下 回复此楼
4楼2022-09-18 20:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 4/200 2026-09-03 03:14 by rM1TE0WVDIIY
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 6/300 2026-09-02 23:59 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +14 Kittylucky 2026-08-27 15/750 2026-09-02 19:35 by liumei0601
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭