应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切拖带和切不开的现象
51/1返回列表
查看: 969  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者tchv8378将赠送您 100 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切拖带和切不开的现象 已有2人参与

求助，我在用PCR的扩增液做单酶切，之前做的好好的没什么问题，最近发现按照之前完全相同的流程酶切切不开或者切开有拖带的现象。我开封了新的引物，新的内切酶，延长了酶切时间，减小了点样时扩增液的点样量，重新提了DNA，将buffer（10x）的含量提升到了酶切体系的1/10，酶切时间从2小时、4小时到过夜都有尝试过但还是没有达到之前的水平。

请问大佬还有其他什么原因吗？万分感谢！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-09-18 13:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-09-18 18:34:04
换一个工程菌 我之前是验证保了两株100测序正确的 其中一株怎么切怎么换，单酶切体系都有两个条带。直到我换了另一株立马没问题了

谢谢回复，我这个用不到工程菌，我这个实验是提取的血液DNA扩增做酶切分型。我在网上看到其他原因可能是buffer和扩增液没有完全混合，请问在配体系时和用枪吹打几次行不行？
赞一下 回复此楼
4楼2022-09-18 20:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
换一个工程菌 我之前是验证保了两株100测序正确的 其中一株怎么切怎么换，单酶切体系都有两个条带。直到我换了另一株立马没问题了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
2楼2022-09-18 18:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
1.工程菌污染
2.实验室气溶胶污染~换个实验室换套枪做实验
把这些问题排除下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
3楼2022-09-18 18:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-09-18 18:36:06
1.工程菌污染
2.实验室气溶胶污染~换个实验室换套枪做实验
把这些问题排除下

谢谢回复，我这个用不到工程菌，我这个实验是提取的血液DNA扩增做酶切分型。我换一个实验室试一下。另外我在网上看到其他原因可能是buffer和扩增液没有完全混合，请问在配体系时和用枪吹打几次行不行？
赞一下 回复此楼
5楼2022-09-18 21:10:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +4 mysdl 2026-03-11 6/300 2026-03-11 23:42 by BruceLiu320
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+3 NSFC2026我来了 2026-03-10 9/450 2026-03-11 23:08 by babero
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +5 Iuruoh 2026-03-11 5/250 2026-03-11 16:19 by 暖阳芬芳
[考研] 接受26届调剂生 +22 猪猪猪毛 2026-03-06 23/1150 2026-03-11 14:55 by Lly031128
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 求调剂 +4 鹤遨予卿 2026-03-09 4/200 2026-03-11 10:47 by @飒飒飒飒
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
[考研] 一志愿天大化工（085600）调剂总分338 +5 蔡大美女 2026-03-09 5/250 2026-03-10 14:44 by ruiyingmiao
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 6/300 2026-03-10 12:43 by 徐海涛11
[考研] 物理学求调剂 +4 sx宋 2026-03-05 4/200 2026-03-10 11:11 by changlu999
[考研] 0703化学调剂 +7 小奶苍 2026-03-07 7/350 2026-03-10 05:17 by anny19840123
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
[考研] 310 070300化学求调剂 +4 扑风铃的猫 2026-03-08 5/250 2026-03-09 19:46 by 30660438
[考研] 0703化学求调剂 +4 很老实人 2026-03-09 4/200 2026-03-09 13:38 by macy2011
[考研] 083000环境科学与工程调剂 +5 加油呀fxy 2026-03-07 6/300 2026-03-08 21:07 by sdgdsdgd
[考研] 334求调剂 +8 Trying] 2026-03-06 8/400 2026-03-08 14:51 by hmn_wj
[基金申请] 进入个人成果库好难，一下午都没进去 +6 mi_dilee 2026-03-05 6/300 2026-03-08 11:43 by lan111
[考研] 0307化学求调剂 +6 0ok0k 2026-03-07 6/300 2026-03-07 20:10 by pies112
[考研] 304求调剂 +4 52hz~~ 2026-03-05 5/250 2026-03-07 15:47 by lature00
[考研] 287求调剂 +3 看看我. 2026-03-05 6/300 2026-03-06 10:40 by Iveryant
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭