应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切拖带和切不开的现象
51/1返回列表
查看: 1401  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者tchv8378将赠送您 100 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)

[求助] 酶切拖带和切不开的现象 已有2人参与

求助，我在用PCR的扩增液做单酶切，之前做的好好的没什么问题，最近发现按照之前完全相同的流程酶切切不开或者切开有拖带的现象。我开封了新的引物，新的内切酶，延长了酶切时间，减小了点样时扩增液的点样量，重新提了DNA，将buffer（10x）的含量提升到了酶切体系的1/10，酶切时间从2小时、4小时到过夜都有尝试过但还是没有达到之前的水平。

请问大佬还有其他什么原因吗？万分感谢！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-09-18 13:31:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-09-18 18:36:06
1.工程菌污染
2.实验室气溶胶污染~换个实验室换套枪做实验
把这些问题排除下

谢谢回复，我这个用不到工程菌，我这个实验是提取的血液DNA扩增做酶切分型。我换一个实验室试一下。另外我在网上看到其他原因可能是buffer和扩增液没有完全混合，请问在配体系时和用枪吹打几次行不行？
赞一下 回复此楼
5楼2022-09-18 21:10:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
换一个工程菌 我之前是验证保了两株100测序正确的 其中一株怎么切怎么换，单酶切体系都有两个条带。直到我换了另一株立马没问题了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
2楼2022-09-18 18:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
1.工程菌污染
2.实验室气溶胶污染~换个实验室换套枪做实验
把这些问题排除下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
我思故我在
3楼2022-09-18 18:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tchv8378

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-09-18 18:34:04
换一个工程菌 我之前是验证保了两株100测序正确的 其中一株怎么切怎么换，单酶切体系都有两个条带。直到我换了另一株立马没问题了

谢谢回复，我这个用不到工程菌，我这个实验是提取的血液DNA扩增做酶切分型。我在网上看到其他原因可能是buffer和扩增液没有完全混合，请问在配体系时和用枪吹打几次行不行？
赞一下 回复此楼
4楼2022-09-18 20:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 zICmwzsBXjbN 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:08 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-30 19:26 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 6/300 2026-08-30 19:02 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:51 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:17 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:33 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 17:25 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:03 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:40 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭