应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白表达BL21(DE3)转接后摇不起来，sds-page无天然蛋白条带
61/1返回列表
查看: 2062  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者蚝油生菜将赠送您 5 个金币

蚝油生菜

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达BL21(DE3)转接后摇不起来，sds-page无天然蛋白条带 已有1人参与

在LB培养基中加入kana抗体和挑单克隆小摇的菌，过夜摇菌培养，第二天早上8.30按1：50的浓度接菌，此时过夜摇的菌od600大约1，要摇到下午3点od600才勉强到0.6左右，加iptg终浓度0.5mM，37℃200rpm诱导4h后菌液变的比未诱导对比组澄清很多，菌液中像沙石状沉淀，然后直接煮沸跑sds-page什么条带都没有，一片空白的，我这个目的蛋白是一种蛋白酶，文献中有表达过，也是用的bl21（de3），应该不是有毒蛋白的问题吧
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-06-08 20:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
试一下低温诱导

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2022-06-08 20:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ymj002

木虫 (小有名气)
应该就是蛋白毒性导致的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-06-08 20:55:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蚝油生菜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-06-08 20:53:32
试一下低温诱导

不诱导的对照组也没有天然蛋白的条带诶

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2022-06-08 21:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蚝油生菜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ymj002 at 2022-06-08 20:55:02
应该就是蛋白毒性导致的

但是这个蛋白的表达我参考了文献做的，完全相同的蛋白，文献中没有看出是毒性蛋白，而且也是采用的相同的宿主菌dl21（de3）表达出来了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2022-06-08 21:17:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtuoxian

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蚝油生菜: 金币+5, ★★★很有帮助 2022-06-09 11:14:26
从新挑一个单克隆菌落，过夜摇起来（10ml）。第二天提取质粒（用1-5ml，剩下的菌液保存起来），酶切之后，确定存在目的条带。
如果克隆是对的，用保存起来的菌液过夜摇起来，重复之前的蛋白表达步骤。

如果再次出现相同情况，建议用提取的质粒重新进行转化（仍然用BL21(DE3), 也可以尝试其他表达菌株）。重复上述步骤。。。
赞一下 回复此楼
6楼2022-06-09 10:56:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蚝油生菜 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 01:14 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-29 23:14 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭