应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白表达BL21(DE3)转接后摇不起来，sds-page无天然蛋白条带
61/1返回列表
查看: 2038  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者蚝油生菜将赠送您 5 个金币

蚝油生菜

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达BL21(DE3)转接后摇不起来，sds-page无天然蛋白条带 已有1人参与

在LB培养基中加入kana抗体和挑单克隆小摇的菌，过夜摇菌培养，第二天早上8.30按1：50的浓度接菌，此时过夜摇的菌od600大约1，要摇到下午3点od600才勉强到0.6左右，加iptg终浓度0.5mM，37℃200rpm诱导4h后菌液变的比未诱导对比组澄清很多，菌液中像沙石状沉淀，然后直接煮沸跑sds-page什么条带都没有，一片空白的，我这个目的蛋白是一种蛋白酶，文献中有表达过，也是用的bl21（de3），应该不是有毒蛋白的问题吧
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-06-08 20:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
试一下低温诱导

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2022-06-08 20:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ymj002

木虫 (小有名气)
应该就是蛋白毒性导致的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-06-08 20:55:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蚝油生菜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-06-08 20:53:32
试一下低温诱导

不诱导的对照组也没有天然蛋白的条带诶

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2022-06-08 21:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蚝油生菜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ymj002 at 2022-06-08 20:55:02
应该就是蛋白毒性导致的

但是这个蛋白的表达我参考了文献做的，完全相同的蛋白，文献中没有看出是毒性蛋白，而且也是采用的相同的宿主菌dl21（de3）表达出来了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2022-06-08 21:17:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtuoxian

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蚝油生菜: 金币+5, ★★★很有帮助 2022-06-09 11:14:26
从新挑一个单克隆菌落，过夜摇起来（10ml）。第二天提取质粒（用1-5ml，剩下的菌液保存起来），酶切之后，确定存在目的条带。
如果克隆是对的，用保存起来的菌液过夜摇起来，重复之前的蛋白表达步骤。

如果再次出现相同情况，建议用提取的质粒重新进行转化（仍然用BL21(DE3), 也可以尝试其他表达菌株）。重复上述步骤。。。
赞一下 回复此楼
6楼2022-06-09 10:56:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蚝油生菜 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 23/1150 2026-08-13 00:35 by 要乐观耀哥
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭