24小时热门版块排行榜

返回列表

【悬赏金币】回答本帖问题，作者sgmmupup将赠送您 5 个金币

sgmmupup

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 10
帖子: 6
在线: 2.3小时
虫号: 29622541
注册: 2022-05-19

[求助] 构建载体连接体系问题已有2人参与

我想问问关于构建载体时连接体系的问题，我的目的片段（1076bp）要连到载体（5900bp）上，测出片段浓度（17.5ng/ul）、载体浓度（9.71ng/ul)，连接酶用的是solutionI，如果要摩尔比1：3的话，在10ul体系里要加多少ul载体和片段DNA呢？做过两三次转化都没长菌

@biostar2009 @biostar2009 发自小木虫IOS客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有19人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有63人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复

1楼 2022-05-24 08:59:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

didongwei

金虫 (著名写手)

应助: 49 (小学生)
金币: 6350.7
散金: 25
红花: 14
帖子: 1048
在线: 78.4小时
虫号: 1909384
注册: 2012-07-25
性别: GG
专业: 植物营养学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你载体和片段的浓度都有一些低，而且你的载体和片段长度不大，回收比例应该比这个高，针对你目前的问题，我的建议如下：
1)扩大连接体系，如将20微升做到40微升，转大肠杆菌，可以同时转两支；
2）重新酶切回收你的片段，让浓度提高后，再做。
PS：连接体系是否按照1:3的比例，是经验值，而且取决于你片段与载体的大小，没必要过度纠结。