应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建载体连接体系问题
51/1返回列表
查看: 756  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者sgmmupup将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sgmmupup

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建载体连接体系问题 已有2人参与

我想问问关于构建载体时连接体系的问题，我的目的片段（1076bp）要连到载体（5900bp）上，测出片段浓度（17.5ng/ul）、载体浓度（9.71ng/ul)，连接酶用的是solutionI，如果要摩尔比1：3的话，在10ul体系里要加多少ul载体和片段DNA呢？做过两三次转化都没长菌

@biostar2009 @biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-05-24 08:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

霸_霸

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测的dna浓度不准，不如看跑胶的亮度，与maker做对比，从而决定加入的量，你这是不长斑，估计大概率问题出现在大载上，是胶回收的吗？扩大体系重新切吧
赞一下 回复此楼
3楼2022-05-25 09:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你载体和片段的浓度都有一些低，而且你的载体和片段长度不大，回收比例应该比这个高，针对你目前的问题，我的建议如下：
1)扩大连接体系，如将20微升做到40微升，转大肠杆菌，可以同时转两支；
2）重新酶切回收你的片段，让浓度提高后，再做。
PS：连接体系是否按照1:3的比例，是经验值，而且取决于你片段与载体的大小，没必要过度纠结。
赞一下 回复此楼
不是优秀，而是不可替代
2楼2022-05-24 15:36:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085602化学工程350，调剂，有没有211的 +5 利好利好. 2026-03-02 9/450 2026-03-03 17:06 by 利好利好.
[考研] 0805总分292，求调剂 +12 幻想之殇 2026-03-01 12/600 2026-03-03 15:58 by tgxtgxtgx9
[考研] 一志愿华中科技大学，化学专业344分，求调剂 +6 邢xing1 2026-03-02 6/300 2026-03-03 15:46 by stewie_jz
[考研] 环境工程学硕288求助调剂 +5 多吃亿口芝士 2026-03-02 5/250 2026-03-03 14:38 by wang_dand
[考研] 化学0703求调剂 学硕 理/工科均可 总分279 +3 1一11 2026-03-03 5/250 2026-03-03 12:37 by 1一11
[考研] 291求调剂 +3 MuoLuo1312 2026-03-02 6/300 2026-03-03 12:13 by 热情沙漠
[考研] 0857调剂 +6 一ll半 2026-02-28 8/400 2026-03-03 09:30 by 热情沙漠
[考研] 276求调剂 +7 路lyh123 2026-02-28 8/400 2026-03-03 09:13 by 杨杨杨紫
[论文投稿] 通讯作者写谁，问题是你意想不到的问题 15+3 阿尔法啊 2026-03-01 3/150 2026-03-03 09:13 by 北京莱茵润色
[考研] 【2026 硕士调剂】课题组 招收调剂生 +3 考研版棒棒 2026-03-02 5/250 2026-03-03 01:45 by kkky.
[考研] 298求调剂 +10 人间唯你是清欢 2026-02-28 14/700 2026-03-02 22:49 by 人间唯你是清欢
[考研] 11408，学硕276求调剂 +3 崔wj 2026-03-02 5/250 2026-03-02 22:14 by 255671
[考研] 求调剂 +11 yunziaaaaa 2026-03-01 13/650 2026-03-02 21:59 by sunny81
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +15 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 15/750 2026-03-02 20:13 by hypershenger
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 5/250 2026-03-02 19:19 by 轻松不少随
[考研] 一志愿中石油（华东）本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:16 by 13853210211
[考研] 材料学调剂 +10 提神豆沙包 2026-02-28 12/600 2026-03-02 09:26 by 李老师！
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭