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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 表达的GST蛋白一直不挂柱，无法纯化
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eric201212

铜虫 (小有名气)

[交流] 表达的GST蛋白一直不挂柱，无法纯化

8M尿素过夜溶解包涵体，梯度透析复性（复性液配方：尿素8/6/4/4/0M(即PBS)， 50mM TB 8.0， 100mM NaCl， 10mM DTT， 0.5mM GSSG， 5%甘油 ） 每个梯度12h，最后蛋白部分有活性，但是无法纯化(磁珠和树脂柱子都试了)  蛋白不挂柱子。
做了大半年了，希望有经验的各位朋友不吝赐教，谢谢~
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1楼 2022-05-17 21:20:46
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lin_7722

铜虫 (正式写手)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
重复多次几次挂住操作试试？蛋白实验，我依稀记得老板研讨会讲过，多次挂住操作可以提高回收率。可你这个一直做不出来，有没有可能是之前哪个环节出了问题。下面是一些tips，可以考量一下修改之前实验操作：没有表达; 构建质粒操作设计缺陷; 表达系统选择不合适; 纯化标签没有充分暴露; 纯化工艺需要优化。
祝好~
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3楼2022-05-26 16:47:43
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chenhuanlong

禁虫 (文学泰斗)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
4楼2022-05-27 23:37:10
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1797303268

新虫 (初入文坛)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
在蛋白的一段加一个his标签 用NI柱纯化
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5楼2022-05-30 21:45:30
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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6楼2022-06-16 13:20:41
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谁请我喝奶茶

新虫 (初入文坛)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1797303268 at 2022-05-30 21:45:30
在蛋白的一段加一个his标签 用NI柱纯化

我的是双标签  镍柱挂不上

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7楼2022-06-19 20:47:13
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谁请我喝奶茶

新虫 (初入文坛)
请问你的挂上了吗？

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8楼2022-06-19 20:47:35
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谁请我喝奶茶

新虫 (初入文坛)
我也在做蛋白纯化 请问你提出来了吗？

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9楼2022-06-19 20:53:29
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SuYuo

铁虫 (小有名气)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
GST标签变性后可能会失去挂柱的能力
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10楼2022-11-16 16:04:31
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王仔牛奶糖

铁虫 (初入文坛)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
9楼: Originally posted by 谁请我喝奶茶 at 2022-06-19 20:53:29
我也在做蛋白纯化 请问你提出来了吗？

你也遇到GST标签不挂柱的情况了吗？我也遇到了
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12楼2023-09-28 10:40:55
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tzynew2楼
2022-05-18 22:11   回复  
eric201212(金币+1): 谢谢参与
XG-WUST11楼
2022-11-18 22:32   回复  
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