应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 表达的GST蛋白一直不挂柱，无法纯化
51/1返回列表
查看: 2300  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 eric201212 的 2 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

eric201212

铜虫 (小有名气)

[交流] 表达的GST蛋白一直不挂柱，无法纯化

8M尿素过夜溶解包涵体，梯度透析复性（复性液配方：尿素8/6/4/4/0M(即PBS)， 50mM TB 8.0， 100mM NaCl， 10mM DTT， 0.5mM GSSG， 5%甘油 ） 每个梯度12h，最后蛋白部分有活性，但是无法纯化(磁珠和树脂柱子都试了)  蛋白不挂柱子。
做了大半年了，希望有经验的各位朋友不吝赐教，谢谢~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-05-17 21:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谁请我喝奶茶

新虫 (初入文坛)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1797303268 at 2022-05-30 21:45:30
在蛋白的一段加一个his标签 用NI柱纯化

我的是双标签  镍柱挂不上

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2022-06-19 20:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

lin_7722

铜虫 (正式写手)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
重复多次几次挂住操作试试？蛋白实验，我依稀记得老板研讨会讲过，多次挂住操作可以提高回收率。可你这个一直做不出来，有没有可能是之前哪个环节出了问题。下面是一些tips，可以考量一下修改之前实验操作：没有表达; 构建质粒操作设计缺陷; 表达系统选择不合适; 纯化标签没有充分暴露; 纯化工艺需要优化。
祝好~
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2022-05-26 16:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenhuanlong

禁虫 (文学泰斗)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
4楼2022-05-27 23:37:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1797303268

新虫 (初入文坛)
★
eric201212(金币+1): 谢谢参与
在蛋白的一段加一个his标签 用NI柱纯化
赞一下 回复此楼
5楼2022-05-30 21:45:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
XG-WUST11楼
2022-11-18 22:32   回复  
查看全部 12 个回答
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴，则可能无法领取此贴金币
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 8/400 2026-10-01 19:08 by Equinoxhua
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:52 by Z9YWQ5EAO3qp
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:14 by Z9YWQ5EAO3qp
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭