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eric201212

铜虫 (小有名气)

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虫号: 23485707

[交流] 表达的GST蛋白一直不挂柱，无法纯化

8M尿素过夜溶解包涵体，梯度透析复性（复性液配方：尿素8/6/4/4/0M(即PBS)， 50mM TB 8.0， 100mM NaCl， 10mM DTT， 0.5mM GSSG， 5%甘油）每个梯度12h，最后蛋白部分有活性，但是无法纯化(磁珠和树脂柱子都试了) 蛋白不挂柱子。
做了大半年了，希望有经验的各位朋友不吝赐教，谢谢~

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1楼 2022-05-17 21:20:46

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1797303268

新虫 (初入文坛)

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虫号: 8417230

★
eric201212(金币+1): 谢谢参与

在蛋白的一段加一个his标签用NI柱纯化

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5楼2022-05-30 21:45:30

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lin_7722

铜虫 (正式写手)

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虫号: 28234544

★
eric201212(金币+1): 谢谢参与

重复多次几次挂住操作试试？蛋白实验，我依稀记得老板研讨会讲过，多次挂住操作可以提高回收率。可你这个一直做不出来，有没有可能是之前哪个环节出了问题。下面是一些tips，可以考量一下修改之前实验操作：没有表达; 构建质粒操作设计缺陷; 表达系统选择不合适; 纯化标签没有充分暴露; 纯化工艺需要优化。
祝好~

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3楼2022-05-26 16:47:43

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