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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大肠杆菌基因敲除
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GOubaa

新虫 (初入文坛)

[交流] 大肠杆菌基因敲除 已有4人参与

最近在做大肠杆菌基因敲除，扩增的打靶片段总是有一条杂带，胶回收后还是同样位置的一条杂带，目的片段1134bp，杂带2000多bp。位置距离远，没理由切不下来啊？请教一下大家这是什么原因。杂带对同源重组影响大吗？DpnI必须在胶回收之前处理吗？胶回收之后是否可以呢？

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1楼 2022-04-20 06:11:52
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lucklizhen

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把PCR退火温度提高一下
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2楼2022-04-21 10:22:36
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wszl666

银虫 (著名写手)
回收后就可以
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基因敲除
3楼2022-04-21 16:15:47
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lixiaolinxi

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
稍微有点杂带不影响的，另外不用加DpnI,我可以帮忙代做

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4楼2022-06-19 00:36:22
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
外源污染，不过做敲除应该影响不大

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5楼2022-06-23 23:19:54
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