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大肠杆菌基因敲除
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GOubaa
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注册: 2021-10-24
专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
[交流]
大肠杆菌基因敲除
已有4人参与
最近在做大肠杆菌基因敲除,扩增的打靶片段总是有一条杂带,胶回收后还是同样位置的一条杂带,目的片段1134bp,杂带2000多bp。位置距离远,没理由切不下来啊?请教一下大家这是什么原因。杂带对同源重组影响大吗?DpnI必须在胶回收之前处理吗?胶回收之后是否可以呢?
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1楼
2022-04-20 06:11:52
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lixiaolinxi
新虫
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在线: 110.9小时
虫号: 3427730
注册: 2014-09-19
性别: GG
专业: 遗传学与生物信息学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
稍微有点杂带不影响的,另外不用加DpnI,我可以帮忙代做
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4楼
2022-06-19 00:36:22
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lucklizhen
新虫
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帖子: 387
在线: 182.6小时
虫号: 1437468
注册: 2011-10-11
专业: 病原细菌与放线菌生物学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把PCR退火温度提高一下
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2楼
2022-04-21 10:22:36
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HK驱魔者
铁虫
(正式写手)
应助: 0
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散金: 5
红花: 1
帖子: 362
在线: 48.2小时
虫号: 9773434
注册: 2018-08-06
专业: 食品科学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
外源污染,不过做敲除应该影响不大
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5楼
2022-06-23 23:19:54
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