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木子君君

新虫 (初入文坛)

[求助] 想问一下条带弥散怎么办 已有2人参与

第一次pcr产物跑胶什么也没有,然后用pcr产物进行二次扩增,用了Q5高保真酶但是跑胶条带弥散,主要是我有很多样品都这样,我的DNA是用试剂盒提取的感觉应该没什么问题,引物是我老师之前课题组师妹用过的,而且有些p出来了,只不过不特异,已经优化过体系了,还是形不成条带,我的条带300多bp,做的温度梯度pcr条带全是弥散的,无法得到一条完整的条带,想问问再怎么做才好啊,才能出来不弥散的条带啊?
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xiayuran

银虫 (小有名气)

调整一下体系里镁离子含量呢,可能是镁离子含量高导致酶活性高,出现了非特异性条带

发自小木虫Android客户端
4楼2021-11-08 07:40:59
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kshdd

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你换个引物试试看,其它都尝试过的话,那就是引物的问题。

1.样品是纯菌还是环境样?
2.纯菌是一样的菌嘛?
3.环境样是一样的环境样嘛?
2楼2021-10-22 11:35:48
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局也土豆

新虫 (小有名气)

你的退火时间会不会太长了,这个也会影响条带弥散的

发自小木虫Android客户端
3楼2021-10-22 18:17:09
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jmqt7140

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2021-12-31 14:14:36
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