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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 想问一下条带弥散怎么办
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木子君君

新虫 (初入文坛)

[求助] 想问一下条带弥散怎么办 已有2人参与

第一次pcr产物跑胶什么也没有，然后用pcr产物进行二次扩增，用了Q5高保真酶但是跑胶条带弥散，主要是我有很多样品都这样，我的DNA是用试剂盒提取的感觉应该没什么问题，引物是我老师之前课题组师妹用过的，而且有些p出来了，只不过不特异，已经优化过体系了，还是形不成条带，我的条带300多bp，做的温度梯度pcr条带全是弥散的，无法得到一条完整的条带，想问问再怎么做才好啊，才能出来不弥散的条带啊?
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1楼 2021-10-20 14:25:55
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局也土豆

新虫 (小有名气)
你的退火时间会不会太长了，这个也会影响条带弥散的

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3楼2021-10-22 18:17:09
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kshdd

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你换个引物试试看，其它都尝试过的话，那就是引物的问题。

1.样品是纯菌还是环境样？
2.纯菌是一样的菌嘛？
3.环境样是一样的环境样嘛？
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2楼2021-10-22 11:35:48
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xiayuran

银虫 (小有名气)
调整一下体系里镁离子含量呢，可能是镁离子含量高导致酶活性高，出现了非特异性条带

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4楼2021-11-08 07:40:59
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jmqt7140

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2021-12-31 14:14:36
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