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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 黄嘌呤氧化酶抑制实验-体外降高尿酸实验
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pyyfm

木虫 (小有名气)

[交流] 黄嘌呤氧化酶抑制实验-体外降高尿酸实验

我做了一个体外降高尿酸实验，用了2种实验方法：
1.XOD 抑制活性测试
反应体系体积为 200 μL，依次向 96 孔板中加入样品 40 μL，  20 U/L 的  XOD
溶液 80 μL，在恒温培养箱内 40℃ 孵育 30 min，之后加入 500 μmol/L 底物黄嘌
呤溶液 80 μL，放入 40℃ 恒温培养箱中孵育 15 min，然后在 292 nm 处记录吸光
度值。实验分别设置有样品组（含样品、酶及底物）、空白组（含底物和样品，
不含酶）、阳性对照组（含别嘌呤醇、酶及底物）、酶组（含酶和底物，不加样品），
各个组均含 3 个复孔，实验重复三次，各样品终浓度为 100 μg/ m L，XOD 抑制
率计算公式为：抑制率（%）=[1-（样品 OD 值-空白 OD 值）/（酶 OD 值-空白
OD 值）]×100%。
这个方法获得实验数据抑制率（%）大于100%。样品与阳性药物的抑制率在高浓度下大于100%

2 NBT法
空白组XOD活性的测定:吸取50mmol·L－1磷酸缓冲液3mL加入至10mL容量瓶中，加入3mL黄嘌呤溶液(2.0mmol·L－1)和0.4mL氯化硝基四氮唑蓝(NBT，1.8mg·L－1)，摇匀，即得XOD活性测定空白溶液。向该空白溶液中加入2.5mL黄嘌呤氧化酶溶液(0.08U·mL－1)，摇匀，得到XOD活性测定溶液，以酶加入时间开始计时，于25℃反应30min后采用752型紫外光栅分光光度计测其560nm下的吸光度值(A0)。样品对XOD抑制活性测定:精密吸取阳性对照药别嘌呤醇(allopurinol)、样品溶液0.5mL，分别置于10mL容量瓶中，按空白组的操作分别加入缓冲液、黄嘌呤溶液和NBT，以酶加入时间开始计时，相同反应条件下，测得各样品的吸光度值(Ax)，根据公式:抑制率(%)=(A0－Ax)/A0×100%计算各化合物对XOD的抑制率。

这种方法存在的问题：不同浓度样品与阳性对照的抑制率不存在梯度，而且抑制率很接近。且阳性药物（别嘌呤醇）在12.5μM的浓度下抑制率只有20%。2种都是相同样品进行测试，得到的抑制率也都不一样。

想请教群里朋友们在做体外XOD 抑制活性测试的时候是否有遇到我一样的情况？
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1楼2021-10-13 11:55:53
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zhaocl_jq

铜虫 (初入文坛)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
请教一下楼主，第一种方法XOD溶液用什么溶剂？
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7楼2021-10-23 14:58:54
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zhangdigua

木虫 (文坛精英)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
加油

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9楼2021-10-23 19:15:32
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何丶sir

新虫 (初入文坛)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
你好，你的nbt法会不会生成蓝黑色沉淀，然后直接摇匀导入比色皿中么？

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15楼2022-04-13 16:29:32
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dai97

新虫 (初入文坛)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
我倒是没有遇到apl组抑制率不成梯度。但是，我最近做的酶反应组反应速度很低，

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16楼2022-07-04 09:37:33
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renbeibei

新虫 (初入文坛)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
请问楼主抑制剂浓度增大，吸光度会变大还是变小啊
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18楼2022-07-12 20:39:13
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1201924

新虫 (初入文坛)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
做一个不同时间的动力学测试看看
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19楼2024-01-25 14:02:33
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魔弈

木虫 (小有名气)
★
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
遇到同样问题，楼主解决问题了吗？
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20楼2024-12-16 15:02:46
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miaojiabing2楼
2021-10-13 12:45   回复  
pyyfm(金币+1): 谢谢参与
nono20093楼
2021-10-13 21:54   回复  
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xiaoqiuqiu204楼
2021-10-13 23:04   回复  
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6号枫木塔5楼
2021-10-14 22:47   回复  
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shenrenren6楼
2021-10-15 10:06   回复  
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bjdxyxy8楼
2021-10-23 18:15   回复  
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bjdxyxy10楼
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tzynew17楼
2022-07-04 18:32   回复  
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