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happygjx

木虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交筛库问题 已有1人参与

我筛了两次cDNA文库,诱饵和文库菌杂交完涂DDO/X-a-gal/AbA的150mm的大板子,第一次为了省点板子,菌液用3ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀,没有进行稀释,直接涂了20个大板每个200ul,一周过去了啥也看不出来。感觉很浓,背景一片灰,有的一片蓝,没法挑单克隆啊。

第二次做按着说明书用10ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀,涂了60个大板每个200ul, 第三天还是啥也看不出来,感觉还是很浓。而10倍稀释后涂了DDO对照板子,第二天就能看出好多单菌落。

有没有大佬做过,求指教。是这个筛选策略有问题还是涂得问题啊?要稀释多少倍涂吗?
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匿名

用户注销 (小有名气)

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2楼2021-10-11 09:17:23
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宇智波斑5547

新虫 (著名写手)

互作太强,菌液太多了。建议整个使用过程中都用四缺加药培养基,即始终以最严苛的条件进行筛选。

发自小木虫IOS客户端
3楼2022-01-04 09:31:41
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