应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 酵母双杂交筛库问题
31/1返回列表
查看: 1693  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者happygjx将赠送您 20 个金币

happygjx

木虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交筛库问题 已有1人参与

我筛了两次cDNA文库，诱饵和文库菌杂交完涂DDO/X－a-gal／AbA的150mm的大板子，第一次为了省点板子，菌液用3ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，没有进行稀释，直接涂了20个大板每个200ul，一周过去了啥也看不出来。感觉很浓，背景一片灰，有的一片蓝，没法挑单克隆啊。

第二次做按着说明书用10ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，涂了60个大板每个200ul， 第三天还是啥也看不出来，感觉还是很浓。而10倍稀释后涂了DDO对照板子，第二天就能看出好多单菌落。

有没有大佬做过，求指教。是这个筛选策略有问题还是涂得问题啊？要稀释多少倍涂吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-10-09 03:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2021-10-11 09:17:23
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

宇智波斑5547

新虫 (著名写手)
互作太强，菌液太多了。建议整个使用过程中都用四缺加药培养基，即始终以最严苛的条件进行筛选。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-01-04 09:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 happygjx 的主题更新
31/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +5 castLight 2026-04-16 5/250 2026-04-16 21:49 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +7 否极泰来2026 2026-04-15 9/450 2026-04-16 13:40 by liumingli7817
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 272分材料子求调剂 +41 Loy0361 2026-04-10 54/2700 2026-04-14 18:00 by lhj2009
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸，感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 一志愿京区985，085401，与本科专业一致，电子信息工程， +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭