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happygjx

木虫 (小有名气)

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在线: 37.5小时
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专业: 植物病理学

[求助] 酵母双杂交筛库问题已有1人参与

我筛了两次cDNA文库，诱饵和文库菌杂交完涂DDO/X－a-gal／AbA的150mm的大板子，第一次为了省点板子，菌液用3ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，没有进行稀释，直接涂了20个大板每个200ul，一周过去了啥也看不出来。感觉很浓，背景一片灰，有的一片蓝，没法挑单克隆啊。

第二次做按着说明书用10ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，涂了60个大板每个200ul，第三天还是啥也看不出来，感觉还是很浓。而10倍稀释后涂了DDO对照板子，第二天就能看出好多单菌落。

有没有大佬做过，求指教。是这个筛选策略有问题还是涂得问题啊？要稀释多少倍涂吗？

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