应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 酵母双杂交筛库问题
31/1返回列表
查看: 1652  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者happygjx将赠送您 20 个金币

happygjx

木虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交筛库问题 已有1人参与

我筛了两次cDNA文库，诱饵和文库菌杂交完涂DDO/X－a-gal／AbA的150mm的大板子，第一次为了省点板子，菌液用3ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，没有进行稀释，直接涂了20个大板每个200ul，一周过去了啥也看不出来。感觉很浓，背景一片灰，有的一片蓝，没法挑单克隆啊。

第二次做按着说明书用10ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，涂了60个大板每个200ul， 第三天还是啥也看不出来，感觉还是很浓。而10倍稀释后涂了DDO对照板子，第二天就能看出好多单菌落。

有没有大佬做过，求指教。是这个筛选策略有问题还是涂得问题啊？要稀释多少倍涂吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-10-09 03:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2021-10-11 09:17:23
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

宇智波斑5547

新虫 (著名写手)
互作太强，菌液太多了。建议整个使用过程中都用四缺加药培养基，即始终以最严苛的条件进行筛选。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-01-04 09:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 happygjx 的主题更新
31/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +3 无懈可击的巨人 2026-03-10 3/150 2026-03-10 17:14 by 泡泡堂路飞
[考研] 22408 275分求调剂 +4 宇智波比 2026-03-03 5/250 2026-03-10 14:50 by 在风落中
[考研] 材料调剂，307分 +10 张泳铭1 2026-03-09 10/500 2026-03-10 11:47 by peike
[考研] 一志愿郑州大学，学硕，物理化学， 333求调剂 +8 李魔女斗篷 2026-03-04 9/450 2026-03-10 10:33 by allen-yin
[考研] 一志愿山东大学105500药学专硕，总分302求调剂 +5 五维天空 2026-03-04 12/600 2026-03-10 09:51 by 五维天空
[考研] 家人们 调剂不迷路 看这里 +8 likeihood 2026-03-09 13/650 2026-03-10 08:09 by likeihood
[考研] 求调剂，一志愿江南大学，食品科学与工程，总分，320 +3 yyyyyukino 2026-03-07 3/150 2026-03-08 23:07 by 清风月
[考研] 301求调剂 +11 朝天椒的双马尾 2026-03-05 11/550 2026-03-08 21:50 by 知足常乐的乐
[考研] 材料工程307，求调剂 +4 我要燃烧你的梦 2026-03-08 4/200 2026-03-08 21:07 by 535743368
[考研] 269求调剂 +3 朔朔话 2026-03-08 4/200 2026-03-08 20:39 by 热情沙漠
[考研] 288求调剂085600材料与化工 +13 Daunrin 2026-03-07 15/750 2026-03-08 19:10 by 加号+
[考研] 081700学硕一志愿北京化工大学数二英一过六级有竞赛求调剂 +5 galaxary 2026-03-07 7/350 2026-03-08 04:37 by wang_dand
[考研] 301求调剂 +5 一二LV 2026-03-07 5/250 2026-03-07 22:20 by 18137688336
[考研] 化学290求调剂 +3 两颗 西柚 2026-03-07 4/200 2026-03-07 20:55 by macy2011
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 求调剂 +3 snw石 2026-03-07 3/150 2026-03-07 20:01 by houyaoxu
[考研] 诚求调剂，323分 有专利/科研/实习经历 +6 橙子cyx 2026-03-06 8/400 2026-03-07 19:06 by 新篇章DFSS
[考研] 304求调剂 +4 52hz~~ 2026-03-05 5/250 2026-03-07 15:47 by lature00
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-04 3/150 2026-03-05 10:39 by Iveryant
[考研] 0703化学 一志愿东北大学 279分求调剂 +4 聂乐平 2026-03-03 4/200 2026-03-04 16:31 by zhukairuo
[考研] 281求调剂 +3 Y?l?h 2026-03-04 3/150 2026-03-04 10:51 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭