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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 酵母双杂交筛库问题
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happygjx

木虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交筛库问题 已有1人参与

我筛了两次cDNA文库，诱饵和文库菌杂交完涂DDO/X－a-gal／AbA的150mm的大板子，第一次为了省点板子，菌液用3ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，没有进行稀释，直接涂了20个大板每个200ul，一周过去了啥也看不出来。感觉很浓，背景一片灰，有的一片蓝，没法挑单克隆啊。

第二次做按着说明书用10ml 0.5xYPDA重悬杂交菌沉淀，涂了60个大板每个200ul， 第三天还是啥也看不出来，感觉还是很浓。而10倍稀释后涂了DDO对照板子，第二天就能看出好多单菌落。

有没有大佬做过，求指教。是这个筛选策略有问题还是涂得问题啊？要稀释多少倍涂吗？
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1楼 2021-10-09 03:54:03
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宇智波斑5547

新虫 (著名写手)
互作太强，菌液太多了。建议整个使用过程中都用四缺加药培养基，即始终以最严苛的条件进行筛选。

发自小木虫IOS客户端
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3楼2022-01-04 09:31:41
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匿名

用户注销 (小有名气)
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2楼2021-10-11 09:17:23
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