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质粒提取浓度低，很多方法都试过了，求助大佬们解决方法 已有3人参与
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质粒提取浓度低，多的时候100ng/ul，少的时候只有20多。很多网上提示的点都改正过了。 菌是新从库存里划的，摇菌时间16小时左右，后来又把质粒转化之后重新划，再提取依然是没有提高。根据官网的信息，质粒是高拷贝。 抗生素浓度加倍过，也有在8小时左右的时候再加过一次（因为有人说氨苄会慢慢分解导致杂菌生长），也没有效果。 提取用的是天根的质粒小提试剂盒，菌液用了1.5毫升（主要是多了之后裂解效果不是很好，即使五分钟了也比较浑浊） PW洗过之后有在室温放置5-10分钟以挥发酒精 EB buffer有提前65水浴过，加入洗脱液后室温放置2分钟，洗脱了两次。 另外偶尔有提取稍微高一点的时候就去酶切了，切胶回收效率更低。。。点样应该有1微克，但是收回后也就只有几纳克了。 因为这俩操作上有相似之处，所以想问问大佬们是不是我有哪种共性的错误导致两个实验效率都很低。 谢谢大家～ |
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6楼2021-09-27 22:16:09
kshdd
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2楼2021-09-25 13:23:03
轩辕佑德
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3楼2021-09-25 15:44:46
网海一粟
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- 性别: GG
- 专业: 生物化学
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你用的什么扩增菌株？保存在表达菌株里的质粒或你把质粒转化到了表达菌株，那确实量少。如果这些信息不清楚，按你现在的做法，准备个1.5mLx5或更多的裂解上清，用同一根柱子吸附就行了。另外pw洗过后没必要放，延长离心时间到4分钟就行了，去酒精效果更好 发自小木虫Android客户端 |
4楼2021-09-26 04:20:21
