| 查看: 6616 | 回复: 9 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者学员CSJmmu将赠送您 20 个金币 | ||
[求助]
质粒提取浓度低，很多方法都试过了，求助大佬们解决方法 已有3人参与
|
||
|
质粒提取浓度低，多的时候100ng/ul，少的时候只有20多。很多网上提示的点都改正过了。 菌是新从库存里划的，摇菌时间16小时左右，后来又把质粒转化之后重新划，再提取依然是没有提高。根据官网的信息，质粒是高拷贝。 抗生素浓度加倍过，也有在8小时左右的时候再加过一次（因为有人说氨苄会慢慢分解导致杂菌生长），也没有效果。 提取用的是天根的质粒小提试剂盒，菌液用了1.5毫升（主要是多了之后裂解效果不是很好，即使五分钟了也比较浑浊） PW洗过之后有在室温放置5-10分钟以挥发酒精 EB buffer有提前65水浴过，加入洗脱液后室温放置2分钟，洗脱了两次。 另外偶尔有提取稍微高一点的时候就去酶切了，切胶回收效率更低。。。点样应该有1微克，但是收回后也就只有几纳克了。 因为这俩操作上有相似之处，所以想问问大佬们是不是我有哪种共性的错误导致两个实验效率都很低。 谢谢大家～ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有187人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
kshdd
金虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2819.8
- 散金: 763
- 红花: 12
- 沙发: 2
- 帖子: 1795
- 在线: 432.2小时
- 虫号: 3384976
- 注册: 2014-08-27
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
2楼2021-09-25 13:23:03
轩辕佑德
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 10520.6
- 散金: 380
- 红花: 15
- 帖子: 4483
- 在线: 456.2小时
- 虫号: 4809358
- 注册: 2016-07-01
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
3楼2021-09-25 15:44:46
网海一粟
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 24549.6
- 帖子: 2876
- 在线: 121.9小时
- 虫号: 249466
- 注册: 2006-05-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
|
你用的什么扩增菌株？保存在表达菌株里的质粒或你把质粒转化到了表达菌株，那确实量少。如果这些信息不清楚，按你现在的做法，准备个1.5mLx5或更多的裂解上清，用同一根柱子吸附就行了。另外pw洗过后没必要放，延长离心时间到4分钟就行了，去酒精效果更好 发自小木虫Android客户端 |
4楼2021-09-26 04:20:21
网海一粟
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 24549.6
- 帖子: 2876
- 在线: 121.9小时
- 虫号: 249466
- 注册: 2006-05-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2021-09-26 04:23:17
6楼2021-09-27 22:16:09
7楼2022-04-22 11:17:16
8楼2022-04-24 16:56:50
tybo 
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1010.9
- 散金: 100
- 红花: 3
- 帖子: 1390
- 在线: 330.8小时
- 虫号: 1896213
- 注册: 2012-07-16
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
| 楼主用的什么方法提取呀？可能的原因就是1、加样量是不是太少？2、如果是磁珠法，洗脱液的量是不是太多了？3、裂解不充分；欢迎楼主和我们上海领骏生物的技术进行沟通交流；也可以用用上海领骏生物的质粒DNA快速提取试剂(磁珠法)，我们实验室做的效果非常好；www.lnjnbio.com |
9楼2023-11-15 08:54:36
AD_com
金虫 (小有名气)
- 应助: 44 (小学生)
- 金币: 925.7
- 散金: 9
- 帖子: 157
- 在线: 91.3小时
- 虫号: 29310367
- 注册: 2022-03-25
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
10楼2023-11-21 08:37:07