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liluolove

[交流] 农杆菌电转的问题,急!!!!

构建了个载体,现在正在用电转法往农杆菌中转,就按照一般的操作流程做了两次了,涂板子却一个菌都不长,纳闷了。我用的农杆菌是LBA4404,培养基是YM,抗生素为rif+str+kan,这些都没什么问题。转化的时候质粒的量是5ul,农杆菌为25ul,电击完后迅速加了培养基。电击后参数为TC:4.9;Volts:2377.现在不知道问题出在那里,请各位虫友帮帮忙!谢谢!
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感受态细胞是不是有问题,太老了或者离子浓度太高?可以再多加些,或者做几个梯度,质粒也做几个梯度,试试。
为梦想努力。
6楼2009-08-20 19:57:36
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
质粒是水溶的吗,有没有引入其他离子之类的杂质啊
毕业回望科研路,满目疮痍一身土
2楼2009-08-20 10:24:37
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

还有,平时我们实验室做的时候都是用100ul的感受态,你的是不是太少了
毕业回望科研路,满目疮痍一身土
3楼2009-08-20 10:25:48
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liluolove

质粒不是连接转化完毕后直接提取的,没有溶解在水中。所有的操做都很小心,在超净工作台上,应该不会有其他杂质吧。
4楼2009-08-20 10:49:17
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