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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 农杆菌电转的问题，急！！！！
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liluolove

[交流] 农杆菌电转的问题，急！！！！

构建了个载体，现在正在用电转法往农杆菌中转，就按照一般的操作流程做了两次了，涂板子却一个菌都不长，纳闷了。我用的农杆菌是LBA4404，培养基是YM，抗生素为rif+str+kan，这些都没什么问题。转化的时候质粒的量是5ul，农杆菌为25ul，电击完后迅速加了培养基。电击后参数为TC:4.9;Volts：2377.现在不知道问题出在那里，请各位虫友帮帮忙！谢谢！
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1楼 2009-08-20 10:11:47
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
★
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质粒是水溶的吗，有没有引入其他离子之类的杂质啊
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毕业回望科研路，满目疮痍一身土
2楼2009-08-20 10:24:37
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
还有，平时我们实验室做的时候都是用100ul的感受态，你的是不是太少了
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毕业回望科研路，满目疮痍一身土
3楼2009-08-20 10:25:48
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liluolove

质粒不是连接转化完毕后直接提取的，没有溶解在水中。所有的操做都很小心，在超净工作台上，应该不会有其他杂质吧。
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4楼2009-08-20 10:49:17
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lipishun

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-20 22:15
质粒用去离子水溶解，电泳，定量后进行电转。质粒浓度不宜过高。不知道你们电击杯要求的最小容积是多少？我以前用的是50微升，参数设置时3000V，5ms。我以前的质粒是pCAMBIA1300系列，只用KAN平板就可以。
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5楼2009-08-20 17:59:23
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感受态细胞是不是有问题，太老了或者离子浓度太高？可以再多加些，或者做几个梯度，质粒也做几个梯度，试试。
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为梦想努力。
6楼2009-08-20 19:57:36
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liluolove

恩，我也觉得可能感受态有问题呢，今天刚将为转化的农杆菌涂板子了，看看能不能长出来~
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7楼2009-08-20 22:00:38
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asr

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
所有的操做都很小心，在超净工作台上，应该不会有其他杂质吧。

杂质不是你理解的意思，
因为培养基加了抗生素了，以前做基本不用超净台，也挺好
应该是感受态细胞的问题
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思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
8楼2009-08-20 22:22:11
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