应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 农杆菌电转的问题，急！！！！
81/1返回列表
查看: 754  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

liluolove

[交流] 农杆菌电转的问题，急！！！！

构建了个载体，现在正在用电转法往农杆菌中转，就按照一般的操作流程做了两次了，涂板子却一个菌都不长，纳闷了。我用的农杆菌是LBA4404，培养基是YM，抗生素为rif+str+kan，这些都没什么问题。转化的时候质粒的量是5ul，农杆菌为25ul，电击完后迅速加了培养基。电击后参数为TC:4.9;Volts：2377.现在不知道问题出在那里，请各位虫友帮帮忙！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-08-20 10:11:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒是水溶的吗，有没有引入其他离子之类的杂质啊
赞一下(1人) 回复此楼
毕业回望科研路，满目疮痍一身土
2楼2009-08-20 10:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
还有，平时我们实验室做的时候都是用100ul的感受态，你的是不是太少了
赞一下 回复此楼
毕业回望科研路，满目疮痍一身土
3楼2009-08-20 10:25:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liluolove

质粒不是连接转化完毕后直接提取的，没有溶解在水中。所有的操做都很小心，在超净工作台上，应该不会有其他杂质吧。
赞一下 回复此楼
4楼2009-08-20 10:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipishun

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-20 22:15
质粒用去离子水溶解，电泳，定量后进行电转。质粒浓度不宜过高。不知道你们电击杯要求的最小容积是多少？我以前用的是50微升，参数设置时3000V，5ms。我以前的质粒是pCAMBIA1300系列，只用KAN平板就可以。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2009-08-20 17:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感受态细胞是不是有问题，太老了或者离子浓度太高？可以再多加些，或者做几个梯度，质粒也做几个梯度，试试。
赞一下(1人) 回复此楼
为梦想努力。
6楼2009-08-20 19:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liluolove

恩，我也觉得可能感受态有问题呢，今天刚将为转化的农杆菌涂板子了，看看能不能长出来~
赞一下 回复此楼
7楼2009-08-20 22:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asr

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
所有的操做都很小心，在超净工作台上，应该不会有其他杂质吧。

杂质不是你理解的意思，
因为培养基加了抗生素了，以前做基本不用超净台，也挺好
应该是感受态细胞的问题
赞一下(1人) 回复此楼
思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
8楼2009-08-20 22:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liluolove 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂 +3 Koxui 2026-03-24 4/200 2026-03-24 22:59 by barlinike
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 08工学调剂 +12 用户573181 2026-03-20 17/850 2026-03-24 21:45 by 番茄炖了西红柿
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭