应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 农杆菌电转的问题，急！！！！
81/1返回列表
查看: 848  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

liluolove

[交流] 农杆菌电转的问题，急！！！！

构建了个载体，现在正在用电转法往农杆菌中转，就按照一般的操作流程做了两次了，涂板子却一个菌都不长，纳闷了。我用的农杆菌是LBA4404，培养基是YM，抗生素为rif+str+kan，这些都没什么问题。转化的时候质粒的量是5ul，农杆菌为25ul，电击完后迅速加了培养基。电击后参数为TC:4.9;Volts：2377.现在不知道问题出在那里，请各位虫友帮帮忙！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-08-20 10:11:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒是水溶的吗，有没有引入其他离子之类的杂质啊
赞一下(1人) 回复此楼
毕业回望科研路，满目疮痍一身土
2楼2009-08-20 10:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
还有，平时我们实验室做的时候都是用100ul的感受态，你的是不是太少了
赞一下 回复此楼
毕业回望科研路，满目疮痍一身土
3楼2009-08-20 10:25:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liluolove

质粒不是连接转化完毕后直接提取的，没有溶解在水中。所有的操做都很小心，在超净工作台上，应该不会有其他杂质吧。
赞一下 回复此楼
4楼2009-08-20 10:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipishun

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-20 22:15
质粒用去离子水溶解，电泳，定量后进行电转。质粒浓度不宜过高。不知道你们电击杯要求的最小容积是多少？我以前用的是50微升，参数设置时3000V，5ms。我以前的质粒是pCAMBIA1300系列，只用KAN平板就可以。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2009-08-20 17:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感受态细胞是不是有问题，太老了或者离子浓度太高？可以再多加些，或者做几个梯度，质粒也做几个梯度，试试。
赞一下(1人) 回复此楼
为梦想努力。
6楼2009-08-20 19:57:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liluolove

恩，我也觉得可能感受态有问题呢，今天刚将为转化的农杆菌涂板子了，看看能不能长出来~
赞一下 回复此楼
7楼2009-08-20 22:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asr

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
所有的操做都很小心，在超净工作台上，应该不会有其他杂质吧。

杂质不是你理解的意思，
因为培养基加了抗生素了，以前做基本不用超净台，也挺好
应该是感受态细胞的问题
赞一下(1人) 回复此楼
思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
8楼2009-08-20 22:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liluolove 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +5 archvillain 2026-08-15 9/450 2026-08-15 12:06 by archvillain
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +6 Ldrop2023 2026-08-13 6/300 2026-08-15 10:09 by tuanggou
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭