应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒酶切求助！
51/1返回列表
查看: 793  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主

[交流] 质粒酶切求助！

请问高手关于酶切方面的问题，
是这样的：
我做的是质粒双酶切，每个酶单独切的时候都能很好的切成线性（条带跑得慢）
为什么我双切的时候，老切不开
小片段的条带很糊，根本看不出明显的条带（感觉前面那条带都有点糊）
大条带也很宽！
无论是双酶切，还是单酶切（分开切）我都试过了
酶切的设计方面应该没问题，都是单切点
请问，想上面这种情况最可能是什么问题
回复此楼

» 猜你喜欢
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2009-08-14 16:37:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
houjinglhy(金币+4,VIP+0):你很有经验啊 我试试吧 谢谢了 8-14 20:03
双切得难处主要在于两种酶共用的缓冲液不好选取，请楼主再检查一下你用的两种酶的共用BUFFER，同时还要注意反应条件。我也经常做双切，楼主的情况我也遇到过。出现这样的情况往往是切不全，导致复杂的缠绕物产生，所以出现了弥散或模糊的情况；另外也有可能是酶出现了星号活性，导致复杂的产物产生。
所以，可以尝试优化反应条件，如加大酶量，加大质粒浓度，缩小反应体积等方法。。实在不行，则可以一步一步切，不过要加大量，否则，最后回收的浓度可能就很小了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-08-14 19:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):我也分开切了 都是切胶回收的 只能切开一个口 第二次切就不行了 8-14 18:15
我也遇到这样的问题,我打算不双酶切了,分步酶切算了,就多个切胶回收和柱纯化.免得每次郁闷.
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-14 17:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):谢谢，我是按最大效率的酶buffer用的 分开切我也试过了 一样不行 8-14 18:14
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-8-14 16:37:
请问高手关于酶切方面的问题，
是这样的：
我做的是质粒双酶切，每个酶单独切的时候都能很好的切成线性（条带跑得慢）
为什么我双切的时候，老切不开
小片段的条带很糊，根本看不出明显的条带（感觉前面那条带 ...

楼主有图吗？

双酶切的缓冲液是按照试剂说明使用的吗？结果不好的话就像楼上说的那样分步酶切回收再酶切吧，注意顺序不要搞错
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2009-08-14 17:55:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shensc727

金虫 (小有名气)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):差距大 1.5KB 和 3.5 KB 谢谢你 8-14 18:35
你的小片段 有多小？大的有多大？差距很大吗？
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2009-08-14 18:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +31 医学老男孩 2026-08-13 70/3500 2026-08-16 08:29 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭