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houjinglhy荣誉版主 (文坛精英)
表达自由，人权之基。
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[交流]
质粒酶切求助！
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请问高手关于酶切方面的问题， 是这样的： 我做的是质粒双酶切，每个酶单独切的时候都能很好的切成线性（条带跑得慢） 为什么我双切的时候，老切不开 小片段的条带很糊，根本看不出明显的条带（感觉前面那条带都有点糊） 大条带也很宽！ 无论是双酶切，还是单酶切（分开切）我都试过了 酶切的设计方面应该没问题，都是单切点 请问，想上面这种情况最可能是什么问题 |
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brightfuture01
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2楼2009-08-14 17:52:03
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5楼2009-08-14 19:11:55
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houjinglhy(金币+3,VIP+0):谢谢啊 呵呵 半个月就出克隆了 很不错了 我也希望能再下个星期完成！ 哈 8-14 20:02
司马诸葛(金币+1,VIP+0):奖励一下 8-14 20:57
houjinglhy(金币+3,VIP+0):谢谢啊 呵呵 半个月就出克隆了 很不错了 我也希望能再下个星期完成！ 哈 8-14 20:02
司马诸葛(金币+1,VIP+0):奖励一下 8-14 20:57
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两个酶单酶切都能切开那证明载体上的这两个酶切位点是没有问题的,所以分步单酶切理论上不存在切不开的问题. 我觉得楼主不要看那个几十bp的小片段了,也不能拿这个说事儿,你连一把试试看.不放心的话可以载体去鳞酸化. 多做几个对照,我也是今天下午才克隆出来,半个月了才克隆好.就是分步酶切然后切完加热失活,再加入1ul的SAP,去鳞,最后是用柱纯化的. 目的片段是双酶切后柱纯化,连接转化,挑了10个,全是阳性克隆. 祝好运. |
7楼2009-08-14 19:49:27