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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

[交流] 质粒酶切求助!

请问高手关于酶切方面的问题,
是这样的:
我做的是质粒双酶切,每个酶单独切的时候都能很好的切成线性(条带跑得慢)
为什么我双切的时候,老切不开
小片段的条带很糊,根本看不出明显的条带(感觉前面那条带都有点糊)
大条带也很宽!
无论是双酶切,还是单酶切(分开切)我都试过了
酶切的设计方面应该没问题,都是单切点
请问,想上面这种情况最可能是什么问题
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从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

小片段切下来也就几十bp吧,这样的片段能看见么跑胶?我没有看到过哦.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-08-14 19:11:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


houjinglhy(金币+1,VIP+0):我也分开切了 都是切胶回收的 只能切开一个口 第二次切就不行了 8-14 18:15
我也遇到这样的问题,我打算不双酶切了,分步酶切算了,就多个切胶回收和柱纯化.免得每次郁闷.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-14 17:52:03
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smallcat227

木虫 (著名写手)


houjinglhy(金币+1,VIP+0):谢谢,我是按最大效率的酶buffer用的 分开切我也试过了 一样不行 8-14 18:14
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-8-14 16:37:
请问高手关于酶切方面的问题,
是这样的:
我做的是质粒双酶切,每个酶单独切的时候都能很好的切成线性(条带跑得慢)
为什么我双切的时候,老切不开
小片段的条带很糊,根本看不出明显的条带(感觉前面那条带 ...

楼主有图吗?

双酶切的缓冲液是按照试剂说明使用的吗?结果不好的话就像楼上说的那样分步酶切回收再酶切吧,注意顺序不要搞错
3楼2009-08-14 17:55:24
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shensc727

金虫 (小有名气)


houjinglhy(金币+1,VIP+0):差距大 1.5KB 和 3.5 KB 谢谢你 8-14 18:35
你的小片段 有多小?大的有多大?差距很大吗?
4楼2009-08-14 18:30:42
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