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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒酶切求助！
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主

[交流] 质粒酶切求助！

请问高手关于酶切方面的问题，
是这样的：
我做的是质粒双酶切，每个酶单独切的时候都能很好的切成线性（条带跑得慢）
为什么我双切的时候，老切不开
小片段的条带很糊，根本看不出明显的条带（感觉前面那条带都有点糊）
大条带也很宽！
无论是双酶切，还是单酶切（分开切）我都试过了
酶切的设计方面应该没问题，都是单切点
请问，想上面这种情况最可能是什么问题
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2009-08-14 16:37:49
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shensc727

金虫 (小有名气)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):差距大 1.5KB 和 3.5 KB 谢谢你 8-14 18:35
你的小片段 有多小？大的有多大？差距很大吗？
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4楼2009-08-14 18:30:42
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):我也分开切了 都是切胶回收的 只能切开一个口 第二次切就不行了 8-14 18:15
我也遇到这样的问题,我打算不双酶切了,分步酶切算了,就多个切胶回收和柱纯化.免得每次郁闷.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-14 17:52:03
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
houjinglhy(金币+1,VIP+0):谢谢，我是按最大效率的酶buffer用的 分开切我也试过了 一样不行 8-14 18:14
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-8-14 16:37:
请问高手关于酶切方面的问题，
是这样的：
我做的是质粒双酶切，每个酶单独切的时候都能很好的切成线性（条带跑得慢）
为什么我双切的时候，老切不开
小片段的条带很糊，根本看不出明显的条带（感觉前面那条带 ...

楼主有图吗？

双酶切的缓冲液是按照试剂说明使用的吗？结果不好的话就像楼上说的那样分步酶切回收再酶切吧，注意顺序不要搞错
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3楼2009-08-14 17:55:24
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
小片段切下来也就几十bp吧,这样的片段能看见么跑胶?我没有看到过哦.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-08-14 19:11:55
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