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皓月星海

新虫 (小有名气)

[交流] 目的基因扩不出来

这个实验卡了很久了，目的条带P不出来。
我可以确定以下几个方面没问题。
第一，cdna没有问题，这个用其它引物验证过。
第二，我操作没有问题，我做其它引物都是成功的。
第三，所用试剂没问题，用的hifi酶。
除此之外，我已经设计了三对引物了，tm值大致都在55度到60度，上下游引物相差没有超过四度，每一对都从48度到65度进行了验证。均没有成功，甚至连杂带都看不到，就是啥都没有。
我人傻了，第一次遇到这种硬茬。我觉得跟引物有关系，因为初始序列就有些扯犊子，但是应该不至于啥也跑不出来呀，各位大哥帮忙看看，有哪些地方可能我没照顾到。谢谢大哥们

目的基因扩不出来


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1楼 2021-05-02 09:21:51
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好啊啊啊

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
皓月星海(fuyuandj86代发): 金币+4 2021-10-05 12:56:45
模版有损伤 重新来吧 连杂带都看不到肯定不正常

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3楼2021-05-02 09:47:37
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普通回帖

皓月星海

新虫 (小有名气)
目的片段长度大概为1600左右

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2楼2021-05-02 09:22:32
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fuyuandj86

版主 (著名写手)
★
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
可能你这个基因在这个cDNA里就是含量较低。数据库里查一下目的基因表达量较高的组织，用表达水平较高的组织来源的细胞重新提个RNA吧。
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5楼2021-05-02 12:25:44
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fengxueren

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
皓月星海(fuyuandj86代发): 金币+4 2021-10-05 12:56:52
做RACE吧

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10楼2021-05-02 23:57:21
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皓月星海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 好啊啊啊 at 2021-05-02 09:47:37
模版有损伤 重新来吧 连杂带都看不到肯定不正常

模板应该不会损伤吧，正常提取的啊

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11楼2021-05-03 13:59:15
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皓月星海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2021-05-02 12:25:44
可能你这个基因在这个cDNA里就是含量较低。数据库里查一下目的基因表达量较高的组织，用表达水平较高的组织来源的细胞重新提个RNA吧。

重新提过，根里面表达最高，还是没有出来

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12楼2021-05-03 14:00:33
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皓月星海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 好啊啊啊 at 2021-05-02 09:47:37
模版有损伤 重新来吧 连杂带都看不到肯定不正常

模板应该没有问题吧，另外一个长度差不多的目的基因都可以P出来呀

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14楼2021-05-06 08:49:19
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tzynew4楼
2021-05-02 09:53   回复  
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xiaoqiuqiu206楼
2021-05-02 13:38   回复  
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slytjiaofei7楼
2021-05-02 13:51   回复  
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假大空8楼
2021-05-02 15:03   回复  
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顶
bjdxyxy9楼
2021-05-02 22:05   回复  
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。 发自小木虫Android客户端
anovo13楼
2021-05-03 16:37   回复  
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miaojiabing15楼
2021-05-06 09:05   回复  
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晴天天天e16楼
2021-05-06 11:16   回复  
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bjdxyxy17楼
2021-05-06 15:07   回复  
gter_wang18楼
2021-05-06 15:45   回复  
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happyever8319楼
2021-05-06 15:47   回复  
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nono200920楼
2021-10-03 22:31   回复  
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
·
刀劈三关21楼
2021-10-04 22:06   回复  
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