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皓月星海

新虫 (小有名气)

[交流] 目的基因扩不出来

这个实验卡了很久了，目的条带P不出来。
我可以确定以下几个方面没问题。
第一，cdna没有问题，这个用其它引物验证过。
第二，我操作没有问题，我做其它引物都是成功的。
第三，所用试剂没问题，用的hifi酶。
除此之外，我已经设计了三对引物了，tm值大致都在55度到60度，上下游引物相差没有超过四度，每一对都从48度到65度进行了验证。均没有成功，甚至连杂带都看不到，就是啥都没有。
我人傻了，第一次遇到这种硬茬。我觉得跟引物有关系，因为初始序列就有些扯犊子，但是应该不至于啥也跑不出来呀，各位大哥帮忙看看，有哪些地方可能我没照顾到。谢谢大哥们

目的基因扩不出来


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1楼 2021-05-02 09:21:51
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fengxueren

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
皓月星海(fuyuandj86代发): 金币+4 2021-10-05 12:56:52
做RACE吧

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10楼2021-05-02 23:57:21
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皓月星海

新虫 (小有名气)
目的片段长度大概为1600左右

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2楼2021-05-02 09:22:32
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好啊啊啊

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
皓月星海(fuyuandj86代发): 金币+4 2021-10-05 12:56:45
模版有损伤 重新来吧 连杂带都看不到肯定不正常

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3楼2021-05-02 09:47:37
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fuyuandj86

版主 (著名写手)
★
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
可能你这个基因在这个cDNA里就是含量较低。数据库里查一下目的基因表达量较高的组织，用表达水平较高的组织来源的细胞重新提个RNA吧。
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5楼2021-05-02 12:25:44
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简单回复
bjdxyxy9楼
2021-05-02 22:05   回复  
皓月星海(金币+1): 谢谢参与
。 发自小木虫Android客户端
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