| 查看: 1992 | 回复: 12 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者Ma丶lone将赠送您 30 个金币 | |||
[求助]
求助，毕赤酵母系统表达阿魏酸酯酶，蛋白没有活性，可能哪些问题，该怎么解决现状？ 已有2人参与
|
|||
|
本人初入分子生物，用PPIZCA质粒重组了阿魏酸酯酶的基因序列，然后我把重组质粒导入毕赤酵母中。结果是，PCR和测序验证基因大小和序列没问题，western blot也做了能看到所在处清晰的条带，但是有一次出现了包涵体，这一次没有，我用这一次的粗酶液和提纯的蛋白测试酶活性，结果一点活性没有。请教大佬帮我分析一下可能的原因和解决办法。 @gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
职称评审没过，求安慰
已经有49人回复
-
26申博自荐
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有17人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有22人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有4人回复
-
三无产品还有机会吗
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7560.7
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1347.9小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
3楼2021-03-28 12:48:27
forhighbio 
捐助贵宾 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 825.8
- 散金: 100
- 红花: 20
- 帖子: 1200
- 在线: 20.3小时
- 虫号: 15753792
- 注册: 2019-07-28
- 专业: 微生物学
2楼2021-03-28 11:07:24
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
4楼2021-03-28 22:42:20
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
5楼2021-03-28 22:43:01
|
嗯嗯，我的是胞内表达，用的200w，10s超声，10s停止，一共20min的超声条件，加了ripa和pi，我这个是水解酶，不知道是我在提的过程中失活了。对了，我的粗酶液酶活检测，是我50毫升培养液取了100微升的上清做的活性检测，这个量是有些少了吗？一般需要富集粗酶液吗？ 发自小木虫Android客户端 |
6楼2021-03-30 14:18:56
7楼2021-03-30 14:21:03
8楼2021-03-30 14:21:59
|
可溶提纯的，我有histag标签我用的亲和层析法提纯的。我的基因序列对，电泳分子大小也对，蛋白条带也对，就是酶活没有。这个你碰到过吗？还是我酶活检测的样品太少了吗？或者中间被我弄失活了？ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2021-03-30 14:24:29
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
10楼2021-03-30 20:02:07