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Ma丶lone

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助，毕赤酵母系统表达阿魏酸酯酶，蛋白没有活性，可能哪些问题，该怎么解决现状？已有2人参与

本人初入分子生物，用PPIZCA质粒重组了阿魏酸酯酶的基因序列，然后我把重组质粒导入毕赤酵母中。结果是，PCR和测序验证基因大小和序列没问题，western blot也做了能看到所在处清晰的条带，但是有一次出现了包涵体，这一次没有，我用这一次的粗酶液和提纯的蛋白测试酶活性，结果一点活性没有。请教大佬帮我分析一下可能的原因和解决办法。

@gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端

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1楼 2021-03-28 08:03:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by Ma丶lone at 2021-03-30 14:18:56
嗯嗯，我的是胞内表达，用的200w，10s超声，10s停止，一共20min的超声条件，加了ripa和pi，我这个是水解酶，不知道是我在提的过程中失活了。对了，我的粗酶液酶活检测，是我50毫升培养液取了100微升的上清做的活性 ...

没看懂。粗酶液是破菌后取得上清测得，还是发酵液上清？

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