| 查看: 2098 | 回复: 12 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者Ma丶lone将赠送您 30 个金币 | ||
[求助]
求助，毕赤酵母系统表达阿魏酸酯酶，蛋白没有活性，可能哪些问题，该怎么解决现状？ 已有2人参与
|
||
|
本人初入分子生物，用PPIZCA质粒重组了阿魏酸酯酶的基因序列，然后我把重组质粒导入毕赤酵母中。结果是，PCR和测序验证基因大小和序列没问题，western blot也做了能看到所在处清晰的条带，但是有一次出现了包涵体，这一次没有，我用这一次的粗酶液和提纯的蛋白测试酶活性，结果一点活性没有。请教大佬帮我分析一下可能的原因和解决办法。 @gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
表哥与省会女结婚，父母去帮带孩子被省会女气回家生重病了
已经有12人回复
-
依托企业入选了国家启明计划青年人才。有无高校可以引进的。
已经有14人回复
-
江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后
已经有3人回复
-
AI 太可怕了，写基金时，提出想法，直接生成的文字比自己想得深远，还有科学性
已经有11人回复
-
依托企业入选了国家启明计划青年人才。有无高校可以引进的。
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7571.7
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1363.9小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
3楼2021-03-28 12:48:27
forhighbio 
捐助贵宾 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 825.8
- 散金: 100
- 红花: 20
- 帖子: 1200
- 在线: 20.3小时
- 虫号: 15753792
- 注册: 2019-07-28
- 专业: 微生物学
2楼2021-03-28 11:07:24
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
4楼2021-03-28 22:42:20
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
5楼2021-03-28 22:43:01
|
嗯嗯，我的是胞内表达，用的200w，10s超声，10s停止，一共20min的超声条件，加了ripa和pi，我这个是水解酶，不知道是我在提的过程中失活了。对了，我的粗酶液酶活检测，是我50毫升培养液取了100微升的上清做的活性检测，这个量是有些少了吗？一般需要富集粗酶液吗？ 发自小木虫Android客户端 |
6楼2021-03-30 14:18:56
7楼2021-03-30 14:21:03
8楼2021-03-30 14:21:59
|
可溶提纯的，我有histag标签我用的亲和层析法提纯的。我的基因序列对，电泳分子大小也对，蛋白条带也对，就是酶活没有。这个你碰到过吗？还是我酶活检测的样品太少了吗？或者中间被我弄失活了？ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2021-03-30 14:24:29
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
10楼2021-03-30 20:02:07