| 查看: 889 | 回复: 15 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
Anson1358铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
救命！载体构建！
|
||
|
大家好啊！小弟在这里请教大家一个问题。 我在做载体构建，将一个1700bp的片段连接到pCAMBIA1301上，首先PCR得到1700bp的插入片段，在该片段的两端分别有Kpn I与BamH I酶切位点。片段与载体用这两种酶双酶切后，用T4 DNA连接酶（TAKARA）连接。可是一直都没有链接成功。我开始时是同时双酶切的，后来改成分步酶切。但同样没有连接上。 后来我PCR后直接将PCR产物与pMD18-T 载体连接，同样连接效率很差。挑取了15个担菌落只有1个是连接上的，但连接方向是反向的。我用Kpn I 与BamH I 分步酶切后于pCAMBIA1301连接，转化后没有长出菌来。 我做了很长时间了，各种方法都试啦，都不成功。小弟都没有继续做下去的勇气啦。还望哪位仁兄给指点一下。不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
材料学硕333求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有7人回复
-
收08调剂生
已经有6人回复
-
材料专硕找调剂
已经有5人回复
-
085602 289分求调剂
已经有5人回复
-
化工专硕求调剂
已经有3人回复
-
274求调剂
已经有5人回复
-
调剂
已经有3人回复
-
08工学调剂
已经有15人回复
-
招08考数学
已经有16人回复
guotieying
银虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 269
- 红花: 6
- 帖子: 814
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 518887
- 注册: 2008-03-05
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
2楼2009-08-06 15:31:36
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
3楼2009-08-06 15:37:55
4楼2009-08-06 15:38:57
银杏下
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2098.1
- 散金: 220
- 帖子: 210
- 在线: 74.3小时
- 虫号: 817163
- 注册: 2009-07-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2009-08-06 15:40:52
Anson1358
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6449.5
- 散金: 794
- 红花: 3
- 沙发: 19
- 帖子: 1153
- 在线: 674.9小时
- 虫号: 627110
- 注册: 2008-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2009-08-06 15:44:22
wjw992008
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 686.9
- 散金: 50
- 帖子: 224
- 在线: 83.4小时
- 虫号: 324824
- 注册: 2007-03-16
- 性别: GG
- 专业: 临床检验新技术
7楼2009-08-06 16:38:14
beisimai895
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4456.6
- 帖子: 231
- 在线: 191.5小时
- 虫号: 513938
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2009-08-06 17:22:29
Anson1358
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6449.5
- 散金: 794
- 红花: 3
- 沙发: 19
- 帖子: 1153
- 在线: 674.9小时
- 虫号: 627110
- 注册: 2008-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2009-08-06 19:41:44
银杏下
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2098.1
- 散金: 220
- 帖子: 210
- 在线: 74.3小时
- 虫号: 817163
- 注册: 2009-07-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2009-08-06 20:31:53
