| 查看: 1103 | 回复: 15 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
Anson1358铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
救命！载体构建！
|
||
|
大家好啊！小弟在这里请教大家一个问题。 我在做载体构建，将一个1700bp的片段连接到pCAMBIA1301上，首先PCR得到1700bp的插入片段，在该片段的两端分别有Kpn I与BamH I酶切位点。片段与载体用这两种酶双酶切后，用T4 DNA连接酶（TAKARA）连接。可是一直都没有链接成功。我开始时是同时双酶切的，后来改成分步酶切。但同样没有连接上。 后来我PCR后直接将PCR产物与pMD18-T 载体连接，同样连接效率很差。挑取了15个担菌落只有1个是连接上的，但连接方向是反向的。我用Kpn I 与BamH I 分步酶切后于pCAMBIA1301连接，转化后没有长出菌来。 我做了很长时间了，各种方法都试啦，都不成功。小弟都没有继续做下去的勇气啦。还望哪位仁兄给指点一下。不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有11人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有57人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有9人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有13人回复
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
3楼2009-08-06 15:37:55
guotieying
银虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 269
- 红花: 6
- 帖子: 814
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 518887
- 注册: 2008-03-05
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
2楼2009-08-06 15:31:36
4楼2009-08-06 15:38:57
银杏下
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2098.1
- 散金: 220
- 帖子: 210
- 在线: 74.3小时
- 虫号: 817163
- 注册: 2009-07-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2009-08-06 15:40:52
