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求助：重组质粒双酶切验证，电泳检测条带都偏大
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最近做一个克隆，用的是PET-28a载体（5369bp），目的片段约300bp，转化后挑斑提质粒，双酶切（BamH 1、Hind 3）后电泳检测条带都偏大(Maker为1kp和Maker1) 中间四个为酶切产物 最后一个为空载体回收作对照 切了好几次都是这样 为什么啊 郁闷！ 是不是克隆又失败了 恳求各位高人指点 [ Last edited by xj22667 on 2009-7-30 at 17:10 ] |
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michaelwuqingyu
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9楼2009-07-31 09:43:25
2楼2009-07-30 17:03:58
guotieying
银虫 (正式写手)
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司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:28
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:28
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从你电泳的质量来看，比较差，因为试验中的每一个图片都有保存的价值。你的重组质粒跟空载比起来大（不从maker来看），说明质粒是重组成功的。但是却在目的片段附近看不到所需的酶切片段，1、你的重组质粒酶切不充分；2、目标片段太小，浓度不够；3、所提取的质粒质量比较差，所以导致了酶切不够或者失败。如果是用做论文的话，这个样子的酶切图是绝对用不成的，需要重新的组合，然后跑电泳拍照；4、假使原因2成立，那么你的浓度不够，大大增加了目标片段回收的难度，也给后续的操作曾加了很大的难度。 建议，重新提取质粒，或者是提纯质粒，然后再酶切。 [ Last edited by guotieying on 2009-7-30 at 17:15 ] |
3楼2009-07-30 17:09:46
4楼2009-07-30 17:46:43
