| 查看: 2643 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
求助：重组质粒双酶切验证，电泳检测条带都偏大
|
|||
|
最近做一个克隆，用的是PET-28a载体（5369bp），目的片段约300bp，转化后挑斑提质粒，双酶切（BamH 1、Hind 3）后电泳检测条带都偏大(Maker为1kp和Maker1) 中间四个为酶切产物 最后一个为空载体回收作对照 切了好几次都是这样 为什么啊 郁闷！ 是不是克隆又失败了 恳求各位高人指点 [ Last edited by xj22667 on 2009-7-30 at 17:10 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？
已经有5人回复
-
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了
已经有8人回复
-
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件
已经有7人回复
-
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗
已经有8人回复
-
申请2026年博士
已经有6人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有5人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有5人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有7人回复
2楼2009-07-30 17:03:58
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:28
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:28
|
从你电泳的质量来看，比较差，因为试验中的每一个图片都有保存的价值。你的重组质粒跟空载比起来大（不从maker来看），说明质粒是重组成功的。但是却在目的片段附近看不到所需的酶切片段，1、你的重组质粒酶切不充分；2、目标片段太小，浓度不够；3、所提取的质粒质量比较差，所以导致了酶切不够或者失败。如果是用做论文的话，这个样子的酶切图是绝对用不成的，需要重新的组合，然后跑电泳拍照；4、假使原因2成立，那么你的浓度不够，大大增加了目标片段回收的难度，也给后续的操作曾加了很大的难度。 建议，重新提取质粒，或者是提纯质粒，然后再酶切。 [ Last edited by guotieying on 2009-7-30 at 17:15 ] |
3楼2009-07-30 17:09:46
4楼2009-07-30 17:46:43
5楼2009-07-30 18:27:37
6楼2009-07-31 08:22:58
glucidum
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3260.6
- 散金: 522
- 帖子: 436
- 在线: 80.4小时
- 虫号: 422557
- 注册: 2007-07-15
- 性别: GG
- 专业: 食用真菌学
7楼2009-07-31 08:25:46
haoqian6135
木虫 (正式写手)
蜗牛～
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1764.2
- 帖子: 435
- 在线: 171小时
- 虫号: 733468
- 注册: 2009-03-28
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2009-07-31 08:41:42
michaelwuqingyu
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 750.1
- 散金: 550
- 红花: 1
- 帖子: 897
- 在线: 49.5小时
- 虫号: 256489
- 注册: 2006-06-03
- 专业: 植物生理与生化
9楼2009-07-31 09:43:25
10楼2009-07-31 10:56:14