| 查看: 2968 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助：重组质粒双酶切验证，电泳检测条带都偏大
|
|||
|
最近做一个克隆，用的是PET-28a载体（5369bp），目的片段约300bp，转化后挑斑提质粒，双酶切（BamH 1、Hind 3）后电泳检测条带都偏大(Maker为1kp和Maker1) 中间四个为酶切产物 最后一个为空载体回收作对照 切了好几次都是这样 为什么啊 郁闷！ 是不是克隆又失败了 恳求各位高人指点 [ Last edited by xj22667 on 2009-7-30 at 17:10 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有69人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有11人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有23人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有7人回复
-
filecode
已经有12人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有13人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有7人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有13人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有8人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有22人回复
4楼2009-07-30 17:46:43
2楼2009-07-30 17:03:58
guotieying
银虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 269
- 红花: 6
- 帖子: 814
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 518887
- 注册: 2008-03-05
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:28
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 7-30 17:28
|
从你电泳的质量来看，比较差，因为试验中的每一个图片都有保存的价值。你的重组质粒跟空载比起来大（不从maker来看），说明质粒是重组成功的。但是却在目的片段附近看不到所需的酶切片段，1、你的重组质粒酶切不充分；2、目标片段太小，浓度不够；3、所提取的质粒质量比较差，所以导致了酶切不够或者失败。如果是用做论文的话，这个样子的酶切图是绝对用不成的，需要重新的组合，然后跑电泳拍照；4、假使原因2成立，那么你的浓度不够，大大增加了目标片段回收的难度，也给后续的操作曾加了很大的难度。 建议，重新提取质粒，或者是提纯质粒，然后再酶切。 [ Last edited by guotieying on 2009-7-30 at 17:15 ] |
3楼2009-07-30 17:09:46
5楼2009-07-30 18:27:37
